CRISPR基因编辑技术服务
独家创新CRISPR技术，编辑效率高10倍以上；超300种细胞的6000多例基因编辑成功案例，服务范围覆盖全球。
红棉 · 基因敲除计划
独家KO细胞库，超5000种覆8大信号通路、近150种疾病、近1500种基因。
一招超快研究基因功能--基因敲除细胞混合克隆（KO pool）
CRISPR是一种革命性的基因组编辑技术，是一项有可能会改变世界的技术。虽然这还是一个相对较新的发现，但很快，CRISPR将成为用于生物学研究标准的实验工具。CRISPR最广泛应用之一是敲除特定基因以了解该基因的功能。实验通常需要同时转染大量细胞，形成具有不同Indel的基因编辑细胞混合克隆，也被称为KO（敲除）pool。CRISPR介导产生的KO pool取代了较传统的基于RNAi的方法，正逐渐成为许多研究细胞系基因功能的研究人员的首选方法。KO pool混合了野生型和编辑过的细胞，敲除效率可能会随时间而变化。但是，对于短期测定来说，KO pool是非常有用的。
应用：
具有高敲除效率的KO pool适合直接用于许多类型的测定，而不需要额外挑取单克隆细胞来进行测定，因为基因型畸变可以直接影响到表型状态。因此，KO pool在以下研究领域具有广泛的应用：
1. 增殖测定
2. 基因发现：识别新的癌症驱动基因并发现癌症特异性脆弱性。
3. 药物反应/药物靶标识别
4. 疾病模型发展
5. 抗体验证（免疫印迹/免疫荧光）
CRISPR-U™ 基因编辑KO pool
CRISPR/Cas9系统是一种有效的基因组编辑系统，通过用gRNA和所需的donor序列打靶和取代靶基因序列，进行基因敲除或敲入的基因组编辑操作。通过CRISPR技术制作KO pool，可节省单克隆化而花费的时间和成本。如今，科学家开始从RNAi转移到使用KO pool进行基因的早期探索性研究，因为KO pool降低了进入的成本，并且与RNAi非常相似。此外，CRISPR技术可以产生稳定的蛋白质功能敲除，可以提供比RNAi更彻底的结果。具有更高效率的KO pool对于药物靶标，药物反应，抗体验证，疾病模型开发以及各种功能测定的研究来说非常有用。为了加快生物医学研究的发展，源井生物开发了CRISPR-U™系统，应用于快速而精确的细胞基因编辑。此外，CRISPR产生的KO pool可以与功能丧失测定，高通量筛选，抗体验证和安全药理学研究相结合。源井生物可以定制基因编辑敲除细胞系和KO pool。
图: 定制CRISPR-U™ KO pool的工作流程
源井生物开发的CRISPR-U™优化细胞的基因编辑。其效率和准确性高于传统方法。请立即联系我们了解与您的研究相关的服务吧！
运用：
KO pool可用于研究表达量过低或不可检测的靶蛋白基因
基于CRISPR/Cas9的基因敲除（KO）能够精确扰乱靶基因的功能，并且在理想情况下，通过人类细胞中的分子组学读数将以无偏差的方式分析这些现象。一般来说，这需要一个分离KO单克隆的漫长过程。在这项研究中，研究人员使用了一种策略，避免了进行单克隆分选，并通过使用在基因组上打靶接近序列（40-300 bp）的两个gRNAs的协同组合，在KO pool上实现了快速而有效的基因沉默。研究人员在HepG2细胞中敲除吡哆醛激酶（PDXK）并生成PDXK-KO pool。同时，研究人员还制备PDXK-KO单克隆来进行比较。他们比较了KO单克隆和KO pool中产生的表型蛋白质组学数据。
图1: PDXK-KO细胞的蛋白质组学表型
重复实验之间的标准差显示了KO pool的数据集比三个PDXK-KO单克隆数据集显示出更小的变化（见图1A）。无偏差全蛋白质组分析在HepG2 KO pool中鉴定出了6种显着下调的蛋白质，而在KO克隆中，只鉴定出4种显着下调的蛋白质。我们需要用MS定量对同源蛋白的残留水平进行检测，以排除该截短蛋白在早期终止密码子或外显子跳跃后仍表达，而这可能会扰乱KO表型的分析和解释。
因此，基因敲除（KO）pool同样能够精确地干扰靶基因功能，可通过分子组学读数评估基因敲降以及分析KO表型。使用KO pool，可能是比RNAi更好的研究基因功能的方法。
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Reference::
A Tandem Guide RNA-Based Strategy for Efficient CRISPR Gene Editing of Cell Populations with Low Heterogeneity of Edited Alleles. CRISPR J.2020;3(2):123-134.
