标准品_源井生物

由于人类基因组计划的顺利实施，以及分子生物学技术和生物信息学的快速发展，“精准医疗”、“个体化医疗”、“靶向治疗”等概念在临床中得到了广泛认可，伴随诊断的概念也在此背景下逐渐为大众所熟知。目前许多疾病已证实存在多种驱动基因，并各自有对应靶向药物的解决方案，同时市面上也已开发了多种不同种类的伴随诊断试剂盒。为了提高体外诊断试剂盒研发的准确性，用从点突变细胞系提取的高质量gDNA作为质控的原始材料，不仅能很好的模拟临床样本，更能方便快捷地促进检测试剂盒的研发。

为什么需要高质量gDNA？

高质量gDNA是检测试剂盒开发的第一步，是调配不同突变率的基础。当提取的gDNA含有蛋白、RNA、有机物等杂质时，会影响gDNA的稳定性和均一性，尤其影响其浓度的测定，对后期的研发和生产产生很大的阻碍。
细胞系来源的gDNA是IVD行业质控的必然趋势

由于IVD企业和各种基因突变检测试剂盒的蓬勃发展，在2018年，我国针对“肿瘤个体化治疗相关基因突变检测试剂盒”颁布了最新行业标准（YY/T 1586--2018），其中对“阳性符合率”进行了明确要求，即所使用的阳性质控品组成中，常见突变位点质控品的基质应与实际检测样本基质相同或相近。另外，在《突变基因检测试剂（PCR法）注册技术审查指导原则》中也提及阳性质控品中常见基因突变位点建议采用临床样本提取的DNA储备液或细胞系作为原料。

继我国于2021年4月15日实施生物安全法后，更加严格的生物材料规管也让临床样品的获得更加困难。并且使用临床样品作为阳性质控品存在着许多问题，这让基因突变诊断试剂盒生产商把目光纷纷投向了细胞系。

使用临床样品作为阳性质控品存在的问题：

样品有限，不可再生

异质性高，稳定性差

涉及伦理，受法规影响

罕见位点难获取

无法准确定量，没有明确的拷贝数和等位基因数

细胞系制备的阳性质控品具有以下优势：

日常质控，更好监测平台及人工操作的稳定性，排除背景干扰

更好地进行灵敏度，特异性等性能验证，为平台及流程体系提供准确的质控标准

更准确的界定每个突变的检测限

作为研发使用的质控品，为研发过程提供稳定的质控标准
CRISPR/Cas9基因编辑细胞可模拟任何疾病的临床样品

随着越来越多关键突变位点的发现，以及新靶向治疗方法的开发，细胞系所携带的常见基因突变很难满足目前的创新速度。此外，针对其他适应症，如心血管疾病、中枢神经系统、炎症等，是很难从细胞系上找到针对该疾病的点突变的，因为大部分细胞系是肿瘤细胞系，针对这些适应症的细胞系很少。此外，细胞系的种类十分庞大，每一株细胞系从购买、培养、提取基因组到测序，不会是一个低成本和高效的方法。而且极有可能验证完大量细胞系之后，也无法找到携带该突变的细胞系。在这种情况下，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在细胞系中定点引入疾病突变成为解决上述问题的重要手段，最终高效实现临床样本的高度模拟。

源井的产品和服务

更快拥有EZ-editor™系列产品和
一系列红棉™点突变方案智能设计系统等
辅助分析工具加持，项目进展更快

更高独立研发的CRISPR-U™
结合经优化的基因编辑点突变系统，
阳性率更高

更强 12年基因编辑经验，
拥有数千例基因编辑成功案例，
为行业之最

伴随诊断

作为一种体外诊断技术，伴随诊断结果能提供有关患者针对特定治疗药物的治疗反应的信息，从而确定最有可能针对治疗药物产生响应的患者群体，有助于在治疗前与治疗过程中制定与调整治疗方案，以及改善治疗预后并降低保健开支。目前，借助伴随诊断技术得到的基因诊断信息进行肿瘤的个体化治疗已成为现代医学领域的热门发展趋势。

凭借超12年的细胞系培养与基因编辑经验，源井生物可提供高品质的gDNA现货产品及服务，以满足试剂产品的研发、质控与注册报证等多种需求。

产品（gDNA）

准确性好

稳定性强

高度模拟

应用广泛

突变基因	突变碱基	突变氨基酸	基因型
BRAF	c.1799T>A	p.V600E	纯合
EGFR	c.2235_2249del15	p.E746-A750del(1)	杂合
	c.2369C> T	p.T790M	杂合
	c.2155G>A	p.G719S	杂合
	c.2303G>T	p.S768I	纯合
	c.2236_2250del15	p.E746-A750del(2)	杂合
	c.2573T>G	p.L858R	杂合
KRAS	c.34G>A	p.G12S	纯合
	c.35G>C	p.G12A	纯合
	c.38G>A	p.G13D	杂合
	c.35G>A	p.G12D	纯合
	c.35G>T	p.G12V	纯合
	C.182A>T	p.Q61L	杂合
	c.183A>T	p.Q61H	纯合
NRAS	c.35G>A	p.G12D	杂合
	c.181C>A	p.Q61K	杂合
	c.34G>T	p.G12C	杂合
	c.34G>A	p.G12S	杂合
	C.183A>T	p.Q61H	杂合
	C.182A>T	p.Q61L	杂合
PIK3CA	c.1633G>A	p.E545K	杂合
	c.3140A>G	p.H1047R	杂合
	c.1624G>A	p.E542K	杂合

服务（定制细胞系）

稳定性好

纯度高

可应用于多种平台

高度模拟

特色定制服务

针对罕见肿瘤突变位点或者其他适应症，源井生物自主研发的CRISPR-U™技术可在细胞系中高效引入目的突变。

CRISPR-U™是源井生物自主研发的基因编辑技术，CRISPR-U™技术比普通CRISPR/Cas9技术的基因切割效率更高，同时可以大幅度提升同源重组效率，轻松实现细胞和动物水平的基因敲除（KO）、基因点突变（PM）和基因敲入（KI）。利用CRISPR-U™的技术优势，源井已成功在超过200种细胞系上实现基因编辑。超200种细胞、5000例基因的编辑经验保障实验方案与载体质量；成熟转染体系与转染专用培养基显著提高转染率；单克隆生长培养基显著提高了至少30%单克隆形成率，以及单克隆鉴定试剂盒实现早期单克隆（96孔板阶段）的批量化鉴定等，源井从实验各环节入手全面优化了实验体系，保证基因编辑细胞实验成功率的有效提升，轻松交付阳性克隆！

高频位点清单

药物代谢酶和药物作用靶点

药物体内代谢、转运及药物作用靶点基因的遗传变异及其表达水平的变化可通过影响药物的体内浓度和敏感性，导致药物反应性个体差异。药物基因组学已成为指导临床个体化用药、评估严重药物不良反应发生风险、指导新药研发和评价新药的重要工具。对药物代谢酶和药物靶点基因进行检测可指导临床针对特定的患者选择合适的药物和给药剂量，实现个体化用药，从而提高药物治疗的有效性和安全性，防止严重药物不良反应的发生。目前美国FDA和我国食品药品监督管理局（CFDA）都已批准了一系列的个体化用药基因诊断试剂盒。针对这一趋势，源井推出药物代谢酶和药物作用靶点细胞系或gDNA定制服务。

心脑血管疾病

基因	突变
CYP2C19	CYP2C19*2，5号外显子c.681G>A，SNP rs424428
CYP2C19	CYP2C19*3，4号外显子c.636G>A，SNP rs4986893
CYP2C19	CYP2C19*17，启动子c.-806C>T， SNP rs12248560
ALDH2	12号外显子，Glu504Lys，SNP rs671
APOE	4号外显子，Cys130Arg，c.388T>C，SNP rs429358
APOE	4号外显子，Arg176Cys， c.526C>T，SNP rs7412
SLCO1B1	5号外显子，Asn130Aspc，388 A>G，SNP rs2306283
SLCO1B1	6号外显子，Val174Ala，c.521 T>C，SNP rs4149056
CYP2C9*3	Ile359Leu，A1075C（NM_000771.4）
CYP2C9*2	Arg144Cys，C430T（NM_000771.4）
ADRB1	Gly389Arg（NM_000684.3:c.1165G>A/C）
ACE I/D	内含子16存在288 bp的Alu插入/缺失

如您的基因不在清单内，请联系我们评估方案在线咨询

关节炎

基因	突变
CYP2C9*3	Ile359Leu，A1075C（NM_000771.4）
CYP2C9*2	Arg144Cys，C430T（NM_000771.4）
G6PD	1388G>A
G6PD	1376G>T
G6PD	1024C>T
G6PD	1004C>T
G6PD	871G>A
G6PD	95A>G

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肿瘤

基因	突变
CYP2D6*3	A2637 deletion
CYP2D6*4	G1934A
CYP2D6*5	CYP2D6 deletion
CYP2D6*10	Pro34Ser，C188T
DPYD*2A	第14外显子1986位A>G（Splice Donor Variant，C>G/T）
TPMT*2	238G>C，Ala80Pro
TPMT*3A	460G>A，Ala154Thr
TPMT*3A	719A>G，Tyr240Cys
TPMT*3B	460G>A，Ala154Thr
TPMT*3C	719A>G，Tyr240Cys
UGT1A1*6	G71R，211G>A
TOP2A	TOP2A基因扩增和基因缺失
G6PD	1388G>A
G6PD	1376G>T
G6PD	1024C>T
G6PD	1004C>T
G6PD	871G>A
G6PD	95A>G

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其它

基因	突变	适应症
CYP3A5*3	第3内含子内22893位存在6986A>G的突变	自身免疫疾病
VKORC1	启动子区-1639 G>A	血栓栓塞性疾病
CYP4F2*3	C>T，V433M（NM_001082.5:c.1297G>A）	血栓栓塞性疾病
NAT2	NM_000015.3:c.341T>A，p.Ile114Asn	结核病
NAT2	NM_000015.3:c.590G>A，p.Arg197Gln
NAT2	NM_000015.3:c.857G>A，p.Gly286Glu
NAT2	NM_000015.3:c.191G>A，p.Arg64Gln
ANKK1	c.2317G>A，Glu713Lys	精神病
IFNL3	基因上游约3 kb处的SNP C>T/G	丙型肝炎
G6PD	1388G>A	疟疾、皮肤病
G6PD	1376G>T
G6PD	1024C>T
G6PD	1004C>T
G6PD	871G>A
G6PD	95A>G
HLA-B	HLA-B1502，HLA-B5801，HLA-B*5701	神经性疾病、高尿酸血症、艾滋病

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产前诊断

产前筛查和产前诊断是优生优育的重要手段。通过产前筛查和产前诊断可以对胎儿是否具有异常进行风险评估及明确诊断，进而选择有针对性的措施预防严重出生缺陷的发生。目前针对产前筛查和产前诊断的试剂盒开发层出不穷，大大提高了产前筛查和产前诊断的普适性。针对这一趋势，源井推出两大热门基因遗传病（耳聋/α-地中海贫血）相关的点突变细胞系或gDNA定制服务。

特色定制服务

疾病	突变基因	突变位点
耳聋	GJB2	c.235delC
耳聋	GJB2	35 del G
耳聋	GJB2	c.35insG
耳聋	GJB2	167 del T
耳聋	GJB2	176-191del 16
耳聋	GJB2	299-300 del AT
耳聋	GJB3	c.538C>T
耳聋	GJB3	547G>A
耳聋	GJB3	494C>T
耳聋	GJB3	1555A>G
耳聋	SLC26A4	c.281C>T
耳聋	SLC26A4	c.589G > A
耳聋	SLC26A4	c.919-2A >G
耳聋	SLC26A4	c.1174A > T
耳聋	SLC26A4	c.1229C > T
耳聋	SLC26A4	c.1707+5 G>A
耳聋	SLC26A4	c.2027T > A
耳聋	SLC26A4	c.2168A > G
耳聋	SLC26A4	IVS7-2A>G
耳聋	SLC26A4	1226G>A
耳聋	SLC26A4	1975G>C
耳聋	SLC26A4	2162C>T
α-地中海贫血	HBA	（--SEA/）
α-地中海贫血	HBA	（-α4.2/）
α-地中海贫血	HBA	（-α3.7/）
α-地中海贫血	HBA	（--THAI/）
α-地中海贫血	HBA	WS122
α-地中海贫血	HBA	QS125
α-地中海贫血	HBA	CS142
β-地中海贫血	HBB	CD41-42(-CTTT)
β-地中海贫血	HBB	IVS-Ⅱ-654(C>T)
β-地中海贫血	HBB	CD17(AAG>TAG)
β-地中海贫血	HBB	-28（A>G)
β-地中海贫血	HBB	CD26(GAG>AAG)
β-地中海贫血	HBB	CD71-72(＋A)
β-地中海贫血	HBB	CD43(GAG>TAG)
β-地中海贫血	HBB	-29(A>G)
β-地中海贫血	HBB	Initiation codon (ATG>AGG)
β-地中海贫血	HBB	CD14-15(＋G)
β-地中海贫血	HBB	CD27/28(＋C)
β-地中海贫血	HBB	-32(C>A)
β-地中海贫血	HBB	-30(T>C)
β-地中海贫血	HBB	IVS-Ⅰ-1(G>T)
β-地中海贫血	HBB	IVS-Ⅰ-5 (G>C)
β-地中海贫血	HBB	CD31(-C)
β-地中海贫血	HBB	5′UTR Cap＋40-43-42(-AAAC)

源井基因编辑点突变优势

01 独家研发红棉点突变智能方案设计系统，1分钟至少设计评估2套方案，最优方案无需人工；
02 成熟掌握四套技术方案（RNP法/质粒抗性法/BE系统/AAV-Donor法），应对各类突变难题；
03 生产体系全面优化，独家数据分析系统与创新产品显著提高阳性克隆筛选效率，缩短项目周期；

在ipsc细胞中用RNP的方法对APP基因进行c.G2149T点突变，转染后先检测pool重组效率，根据sanger测序结果可以看出gRNA有显著切割效果（图1），根据EZ-editor GAS小工具分析出同源重组基因型占比14%（图2），效率较高，可以进行单克隆铺板。

图1.pool细胞sanger测序结果

图2.EZ-editor GAS小工具分析出同源重组基因型分析结果

在THP-1细胞中用AAV重组方式对IDH2基因进行p.R140W突变，转染后先检测pool重组效率，根据sanger测序结果可以看出gRNA有显著切割效果（图3），根据EZ-editor GAS小工具分析出同源重组基因型占比23%（图4），效率较高，可以进行单克隆铺板。单克隆鉴定过程，筛选到两个突变纯合子。（图5）

图3.pool细胞sanger测序结果

图4.EZ-editor GAS小工具分析出同源重组基因型分析结果

图5.获得的两个纯合子克隆基因型比对结果

AGTTCAAGCTGAAGAAGATGTGGAAAAGTCCCAATGGAACTATC(C→T)GGAACATCCT(G→C)GGGGGGACTGTCTTCCGGGAGCCCATCATCTGCAAAAACATCCCACGCCTAGTCCCTGGCTGGACCAAGCCCATCACCATTGGCAGGCACGCCCATGGCGACCAG

Red characters (C→T) indicate the target mutation site p.R140W (CGG > TGG).
Blue characters (G→C) indicate the silent mutation site (CTG>CTC).
File PK21115-02-A01-PK1344 is the Sanger sequencing result of E8 clone.
File PK21115-02-A03-PK1344 is the Sanger sequencing result of H3 clone.

标准品

源井的产品和服务

伴随诊断

产品（gDNA）

服务（定制细胞系）

高频位点清单

药物代谢酶和药物作用靶点

产前诊断

特色定制服务

源井基因编辑点突变优势

CRISPR技术服务

EZ-editor™系列产品

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