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细胞周期Cell Cycle
细胞周期(cell cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,分为间期与分裂期两个阶段。

间期(interphase)分为三个阶段:DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)

M期(mitosis)即细胞分裂期,分为:前期,中期,后期和末期。

细胞周期的调节主要是通过G1期的阻留而实现的,G0期即指细胞处于阻留的状态。细胞通过M期一分为二,有的可继续分裂进行周期循环,有的转入G0期。G0期是脱离细胞周期暂时停止分裂的一个阶段。但在一定的刺激下,又可进入细胞周期,合成DNA并进行分裂。

G0期的特点为:①未受刺激的G0细胞,DNA合成与细胞分裂的潜力仍然存在; ②当G0细胞受到刺激而增殖时,又能合成DNA并进行细胞分裂。细胞周期的调节主要是通过G1期的阻留而实现的,G0期即指细胞处于阻留的状态。细胞通过M期一分为二,有的可继续分裂进行周期循环,有的转入G0期。G0期是脱离细胞周期暂时停止分裂的一个阶段。但在一定的刺激下,又可进入细胞周期,合成DNA并进行分裂。

细胞周期
间期

  G1期(first gap)即DNA合成前期,从有丝分裂到DNA复制前的一段时期。

主要合成:RNA和核糖体

特       点:物质代谢活跃,迅速合成RNA和蛋白质,细胞体积显著增大

意       义:为下阶段S期的DNA复制作好物质和能量的准备。

  S期(second gap)即DNA合成期

主要合成:DNA、组蛋白以及DNA复制所需要的酶。

  G2期(synthesis)即DNA合成后期,是有丝分裂的准备期。

特       点:DNA合成终止,大量合成RNA及蛋白质,微管蛋白和促成熟因子。

分裂期

  前期(prophase)染色质丝高度螺旋化,逐渐形成短而粗且强嗜碱性的染色体;

两个中心体向相反方向移动,在细胞形成两极;

随后以中心粒随体为起始点,开始合成微管,形成纺锤体;

核仁随染色质螺旋化而逐渐消失;

核被膜开始瓦解为离散的囊泡状内质网。

  中期(metaphase)细胞变为球形,核仁与核被膜完全消失;

染色体移到赤道平面,从纺锤体两极发出的微管附着于每个染色体的着丝点上;

从中期细胞可分离得到完整的染色体群。

  后期(anaphase)着丝点因纺锤体微管的活动而纵裂,两条染色体单体分开,向相反方向移动,接近各自的中心体,

此时细胞被拉长;

由于赤道部细胞膜下方环形微丝束的活动,该部缩窄,细胞呈哑铃形。

  末期(telophase)染色单体逐渐解螺旋,重新出现染色质丝与核仁;

内质网囊泡组合为核被膜;

赤道部缩窄加深,最后完全分裂为两个二倍体子细胞。

技术原理

PI染色-流式细胞术检测细胞周期的原理:

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌合到双链DNA和RNA的碱基对中并与之结合的荧光染料,无碱基特异性。PI与双链DNA结合后可以产生荧光,并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被PI染色后,可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定,然后根据DNA含量的分布情况,可以进行细胞周期的分析。
由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常正常细胞的G1/ G0期具有二倍体细胞的DNA含量(2N) ,而G2/ M期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N) ,而S期的DNA 含量介于二倍体和四倍体之间。PI可以与DNA结合,其荧光强度直接反映细胞内DNA的含量。因此,通过流式细胞仪结合PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期、S期和G2/M 期,获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。
结果示例

参考文献:
A. https://ibook.antpedia.com/z/93690.html
B,C. Xie, Kewei et al. “Yes-associated protein regulates podocyte cell cycle re-entry and dedifferentiation in adriamycin-induced nephropathy.” Cell death & disease vol. 10,12 915. 4 Dec. 2019, doi:10.1038/s41419-019-2139-3

服务周期及结果

服务周期

约5-10个工作日,需根据细胞生长情况及实验设计而定;

客户提供

细胞株、药品、药物处理方式及实验条件参数设置

结果交付

原始数据,分析结果,实验报告

检测细胞周期的其他方法
原理 特点
BrdU法 BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)加入培养基后,可做为细胞DNA复制的原料,BrdU代替胸腺嘧啶核苷掺入到新合成的进入S期(DNA合成期)细胞DNA中。用于检测BrdU的抗体只识别DNA单链中的BrdU,对于未变性的双链DNA可用PI染色。持续的BrdU掺入可用于确定和分析处于DNA合成活跃状态的细胞,区分于那些处于静止期的细胞,从而进行细胞增殖比例的分析;另一方面,不同时间点加入BrdU,可以分析细胞周期动力学。 BrdU可渗入S期细胞的DNA中并稳定存在,随DNA复制进入子代细胞;BrdU会对机体造成不可逆损伤,使用时注意安全。
7-AAD法 7-AAD(7-amino-actinomycin D ,7-氨基放线菌素)是一种核酸染料,它不能通过正常质膜,随着细胞凋亡、细胞死亡过程,质膜对7-AAD的通透性逐渐增加,在合适波长激发光的激发下可发出明亮的红色荧光。通过7-AAD标记DNA的强弱,可将细胞分为三群:7-AAD强为死亡细胞,7-AAD弱是凋亡细胞,7-AAD-中等为正常活力细胞。通过流式细胞仪检测其GO/G1期,S期和G2/M期的DNA含量。 7-AAD同PI 有着相似的荧光特性,但其发射波谱较PI窄,对其他检测通道的干扰更小,在多重荧光染色时是PI的理想替代品,可与多种488nm激发光激发的荧光染料联合使用,如FITC (异硫氰酸荧光素)、PE (藻红蛋白)、APC (别藻蓝蛋白)等。

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