间期(interphase)分为三个阶段:DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)
M期(mitosis)即细胞分裂期,分为:前期,中期,后期和末期。
G0期的特点为:①未受刺激的G0细胞,DNA合成与细胞分裂的潜力仍然存在; ②当G0细胞受到刺激而增殖时,又能合成DNA并进行细胞分裂。细胞周期的调节主要是通过G1期的阻留而实现的,G0期即指细胞处于阻留的状态。细胞通过M期一分为二,有的可继续分裂进行周期循环,有的转入G0期。G0期是脱离细胞周期暂时停止分裂的一个阶段。但在一定的刺激下,又可进入细胞周期,合成DNA并进行分裂。
细胞周期 | |
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间期 |
G1期(first gap)即DNA合成前期,从有丝分裂到DNA复制前的一段时期。 主要合成:RNA和核糖体 特 点:物质代谢活跃,迅速合成RNA和蛋白质,细胞体积显著增大 意 义:为下阶段S期的DNA复制作好物质和能量的准备。 |
S期(second gap)即DNA合成期 主要合成:DNA、组蛋白以及DNA复制所需要的酶。 |
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G2期(synthesis)即DNA合成后期,是有丝分裂的准备期。 特 点:DNA合成终止,大量合成RNA及蛋白质,微管蛋白和促成熟因子。 |
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分裂期 |
前期(prophase)染色质丝高度螺旋化,逐渐形成短而粗且强嗜碱性的染色体; 两个中心体向相反方向移动,在细胞形成两极; 随后以中心粒随体为起始点,开始合成微管,形成纺锤体; 核仁随染色质螺旋化而逐渐消失; 核被膜开始瓦解为离散的囊泡状内质网。 |
中期(metaphase)细胞变为球形,核仁与核被膜完全消失; 染色体移到赤道平面,从纺锤体两极发出的微管附着于每个染色体的着丝点上; 从中期细胞可分离得到完整的染色体群。 |
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后期(anaphase)着丝点因纺锤体微管的活动而纵裂,两条染色体单体分开,向相反方向移动,接近各自的中心体, 此时细胞被拉长; 由于赤道部细胞膜下方环形微丝束的活动,该部缩窄,细胞呈哑铃形。 |
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末期(telophase)染色单体逐渐解螺旋,重新出现染色质丝与核仁; 内质网囊泡组合为核被膜; 赤道部缩窄加深,最后完全分裂为两个二倍体子细胞。 |
PI染色-流式细胞术检测细胞周期的原理:
参考文献:
A. https://ibook.antpedia.com/z/93690.html
B,C. Xie, Kewei et al. “Yes-associated protein regulates podocyte cell cycle re-entry and dedifferentiation in adriamycin-induced nephropathy.” Cell death & disease vol. 10,12 915. 4 Dec. 2019, doi:10.1038/s41419-019-2139-3
服务周期
约5-10个工作日,需根据细胞生长情况及实验设计而定;
客户提供
细胞株、药品、药物处理方式及实验条件参数设置
结果交付
原始数据,分析结果,实验报告
原理 | 特点 | |
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BrdU法 | BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)加入培养基后,可做为细胞DNA复制的原料,BrdU代替胸腺嘧啶核苷掺入到新合成的进入S期(DNA合成期)细胞DNA中。用于检测BrdU的抗体只识别DNA单链中的BrdU,对于未变性的双链DNA可用PI染色。持续的BrdU掺入可用于确定和分析处于DNA合成活跃状态的细胞,区分于那些处于静止期的细胞,从而进行细胞增殖比例的分析;另一方面,不同时间点加入BrdU,可以分析细胞周期动力学。 | BrdU可渗入S期细胞的DNA中并稳定存在,随DNA复制进入子代细胞;BrdU会对机体造成不可逆损伤,使用时注意安全。 |
7-AAD法 | 7-AAD(7-amino-actinomycin D ,7-氨基放线菌素)是一种核酸染料,它不能通过正常质膜,随着细胞凋亡、细胞死亡过程,质膜对7-AAD的通透性逐渐增加,在合适波长激发光的激发下可发出明亮的红色荧光。通过7-AAD标记DNA的强弱,可将细胞分为三群:7-AAD强为死亡细胞,7-AAD弱是凋亡细胞,7-AAD-中等为正常活力细胞。通过流式细胞仪检测其GO/G1期,S期和G2/M期的DNA含量。 | 7-AAD同PI 有着相似的荧光特性,但其发射波谱较PI窄,对其他检测通道的干扰更小,在多重荧光染色时是PI的理想替代品,可与多种488nm激发光激发的荧光染料联合使用,如FITC (异硫氰酸荧光素)、PE (藻红蛋白)、APC (别藻蓝蛋白)等。 |