CRISPR文库筛选 是一种 大规模功能基因筛选技术 ，通过将包含数千至上万个不同sgRNA的文库导入细胞群体，实现对基因组范围内 每个基因的系统敲除、激活或抑制 。在特定选择压力下（如化合物筛选、流式分选等）， 具有相应表型 的sgRNA会在筛选后富集或耗竭，通过NGS测序分析sgRNA的富集或耗竭情况，从而识别关键调控因子。

1) 选择合适的细胞模型

• a) 要求可稳定表达 Cas9 或 dCas9（用于敲除/激活/干扰）
• b) 可满足病毒感染、具有一定的传代能力，并能承受筛选条件（如化合物、低氧等）

2) 文库构建与包装

• a) 选择合适的sgRNA文库（全基因组、通路特异、自定义）
• b) ○构建文库质粒，并包装为慢病毒，保证高质量、低偏差传递到细胞

3) 文库感染与建库

• a) ○低MOI感染目标细胞，保证每个细胞仅携带一个sgRNA
• b) 建立包含足够覆盖度的细胞库（一般要求 >300x /500x覆盖度）

4) 施加筛选压力

• a) 对感染文库的细胞施加特定条件（如化合物处理、传代、流式分选）
• b) 设定处理组与对照组，进行富集筛选

5) 基因组DNA提取与NGS测序

• a) 提取细胞基因组DNA，扩增sgRNA条码区
• b) 进行高通量测序，获得筛选前后sgRNA的丰度变化数据

6) 生物信息分析与候选基因筛选

• a) 使用MAGeCK、edgeR等分析工具识别富集/耗竭的sgRNA
• b) 得出候选关键基因，进一步验证其功能

• 1) 多样化的表型分析平台
  源井生物的多样化表型分析平台可支撑多种功能筛选体系所需，全面覆盖化合物/病毒处理、传代培养、细胞共培养、流式分选、细胞迁移和贴壁、体内筛选等筛选操作。
• 2) 成熟稳定的细胞生物学平台
  源井生物的细胞生物学平台满足大规模细胞培养需求，技术人员具备丰富的细胞培养经验，支持在各类细胞体系上开展功能筛选。
• 3) 全流程精细化服务
  源井生物具备完善的预实验摸索和质量管理体系，能够提供全流程功能筛选服务和CRISPR筛选一站式服务，轻松衔接CRISPR筛选各个流程节点，保证实验连续性和成功率。
• 4) 专业技术和项目管理团队指导
  源井生物具备博士级别的专业技术团队，拥有丰富的功能筛选体系相关专业知识和操作经验，手把手指导功能筛选的设计和操作。