基因点突变细胞

基因点突变细胞系（Point Mutation Cell Line）是一类在特定位点上引入一个或几个碱基变化（点突变）的细胞模型，广泛用于研究疾病致突变、蛋白功能调控、化合物敏感性分析等。

一、RNP法

• ● 将sgRNA和Cas9蛋自在体外孵育形成RNP复合物，与单链oligo共转进细胞内。RNP造成靶点双链断裂后，oligo可通过同源重组的方式，将携带的目标突变引入基因组靶点。
• ● 特点：普遍适用，编辑效率较高，周期较短。
• ● 适用类型:突变位点附近可以找到gRNA序列，细胞可以用电转或脂质体转染。

二、先导编辑器

• ● 通过将工程化的逆转录酶与Cas9单切口酶融合，并结合一种特殊的prime editing guide RNA（pegRNA）来实现基因编辑。
• ● 特点：可修复多种复杂突变，但编辑效率较低，载体设计复杂。
• ● 适用类型：复杂突变，以及突变位点附近无法找到合适的gRNA序列。

三、单碱基编辑器

• ● 将碱基脱氨酶与CRISPR/Cas系统整合开发出的单碱基编辑系统，可在不切断DNA双链的情况下精准引入C/G-T/A及A/T-G/C点突变，从而实现高效精准的基因编辑。
• ● 特点：高效，但符合要求的需求较少。
• ● 适用类型：满足特定单碱基变换（C⇌T；A⇌G），且只有目标位点在活性窗口内。

四、质粒抗性法

• ● Donor用质粒构建，在内含子插入一个抗性基因表达盒，通过药筛提高点突变重组效率。
• ● 特点：适用突变位点附近无法找到合适gRNA序列的需求，费用较高，周期较长。
• ● 适用类型：适用突变位点附近无法找到合适gRNA序列的需求。

在常规CRISPR编辑中，由于HDR效率低，点突变项目通常需10–12周甚至更久。源井生物通过自主研发的EZ-HRex™系统，有效提升同源定向修复（HDR）效率，缩短实验周期。在此平台支持下，我们可在6–8周内交付经过验证的阳性突变克隆，大大加快项目进度，助力科研更高效推进。

在精准基因编辑领域，效率与准确性决定研究进度和结果的可控性。源井生物凭借多年深耕CRISPR技术，基于自主研发的 CRISPR-U™ 平台，创新推出新一代编辑系统 —— EZ-HRex™ 技术，在点突变及片段敲入中实现了效率与稳定性的飞跃。

EZ-HRex™技术升级，成就更高HDR效率；

通过整合自主研发的 U+调控分子，EZ-HRex™ 技术实现两大突破：

• ● 调节细胞周期：有效促进更多细胞在转染后进入S/G2期，显著提升HDR活性窗口；
• ● 抑制NHEJ通路：降低非同源末端连接（NHEJ）活性，减少随机 indel，提高目标突变的精确性和纯度。

实验数据显示，转染后Cell Pool水平的 HDR基因型占比高达84%，大幅优于传统方法。