基因点突变细胞

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基因点突变细胞系

通过核转染法将 gRNA 与 Cas9 蛋白组装而成的 RNP 复合物以及携带目标点突变的单链 Oligo 共转入细胞，然后使用极限稀释法分离单克隆。RNP 复合物对靶位点造成DNA双链断裂后，细胞以Oligo作为模板进行同源重组修复（HDR），将目标点突变重组到基因组靶位点。最后对靶位点进行扩增及测序验证，筛选出突变的阳性克隆。

一文了解点突变研究常用方法>>

EZ-HRex™新技术
源井生物经过数年研发，在原CRISPR-U™基因编辑技术的基础上， 创新性地添加U+分子，将该技术升级为EZ-HRex™。
有效调节细胞周期，促进转染后更多细胞进入S/G2期。
降低NHEJ途径活性，减少indel基因型占比，提高HDR效率。
技术升级后，细胞基因突变和片段敲入的HDR效率得到全面提升，转染后Cell Pool水平的 HDR基因型占比高达84%。

基因点突变细胞服务详情 Point Mutation Cell Line Service Details

细胞类型 肿瘤细胞、常规细胞系、iPS/ES等各类细胞
方案类型 RNP法、先导编辑器、单碱基编辑器、质粒抗性法
交付成果 点突变阳性克隆
周期/价格     在线咨询    添加官方微信号：18054268871（手机同号）
 

300+基因编辑成功细胞

呼吸系统
+
仓鼠肺细胞(V79)人咽鳞癌细胞(FaDu)人支气管上皮细胞(16HBE)人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)人非小细胞肺癌细胞(HCC827)人非小细胞肺癌细胞(NCI-H1299)人肺鳞癌细胞(NCI-H226)人肺鳞癌细胞(SK-MES-1)人肺癌细胞(NCI-H520)人肺癌细胞(Calu-1)人肺癌细胞(A549)
循环系统
+
小鼠成肌细胞(C2C12)人冠状动脉内皮细胞株(HCAEC)小鼠心肌细胞(HL-1)大鼠心肌细胞(H9C2)
内分泌系统
+
人乳腺癌细胞(MCF7)小鼠胰岛素瘤β细胞(NIT-1)人乳腺癌细胞(JIMT-1)人乳腺管癌细胞(T-47D)人原位胰腺腺癌细胞(BxPC-3)小鼠胰腺腺泡细胞(266-6)人前列腺癌细胞(VCaP)人胰腺癌细胞(MIA PaCa-2)小鼠髓样乳腺癌细胞(E0771)小鼠胰腺癌细胞(Pan02)人转移胰腺腺癌细胞(AsPC-1)人乳腺腺癌细胞(SK-BR-3)人胰腺癌细胞(PANC-1)小鼠乳腺癌细胞(4T1)人乳腺癌细胞(ZR-75-1)人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)
脑和神经系统
+
人胶质瘤细胞(U251MG)小鼠小胶质细胞(BV2)人脑微血管内皮细胞(hCMEC/D3)小鼠颅顶前骨细胞亚克隆(MC3T3-E1 Subclone 14)人脑星形胶质母细胞瘤(U-87 MG)大鼠胶质瘤细胞(C6)小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a)人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH)
血液，淋巴系统
+
人B淋巴瘤细胞(Su-DHL-4)弥漫大B细胞淋巴瘤细胞(OCI-LY3)人弥漫大B淋巴瘤细胞(U2932)人急性非B非T淋巴细胞白血病(Reh)人慢性髓原白血病细胞(K-562)人白血病T淋巴细胞(Jurkat, Clone E6-1)大鼠嗜碱性细胞白血病细胞(RBL-2H3)人单核细胞白血病细胞(THP-1)猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)
泌尿系统
+
小鼠前列腺癌细胞(RM-1)大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC-12)远端肾单位细胞(Distal nephron cell line（JU4s）)狗肾细胞(MDCK)人前列腺癌细胞(22RV1)人胚肾细胞(293T)人胚肾细胞(HEK293)人膀胱移行细胞癌细胞(T24)人膀胱癌细胞(5637)人膀胱癌细胞(TCCSUP)
消化系统
+
人结肠腺癌细胞(LS174T)猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)人肝癌细胞(HepaRG)小鼠肝癌细胞(Hepa 1-6)小鼠肝癌细胞(H22)人肝癌细胞(SMMC-7721)人肾癌细胞(ACHN)非洲绿猴肾细胞(Vero)人肾透明细胞腺癌细胞(786-0)人食管鳞癌细胞(KYSE-30)人食管鳞癌细胞(KYSE-150)人胃腺癌细胞(AGS)人胃癌细胞(SGC-7901)人胃癌细胞(HGC-27)人肝胆管癌细胞(RBE)人肝癌细胞(HuH-7)人肝癌细胞(Hep3B)人肝癌细胞(Hep G2)人正常肝细胞(L-02)人结肠腺癌肺转移细胞(T84)人结直肠腺癌细胞(Caco-2)人结直肠腺癌细胞(NCI-H716)人结直肠腺癌上皮细胞(DLD-1)小鼠结肠癌细胞(CT26.WT)小鼠结肠癌细胞(MC38)人结肠癌细胞(COLO 205)人结肠腺癌细胞(RKO)人结肠癌细胞(HT-29)人结肠癌细胞(SW620)人结肠癌细胞(SW480)人结肠癌细胞株(HCT 116)
骨、关节、软组织、 皮肤系统
+
小鼠骨样细胞(MLO-Y4)成釉细胞瘤(hTERT-AM)小鼠鳞状细胞癌细胞(SCC7)小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/0-Ag14)人皮肤鳞癌细胞(A431)小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10)人黑色素瘤细胞(M14)人恶性黑色素瘤细胞(A-375)人纤维肉瘤(HT-1080)人骨肉瘤细胞(U-2 OS)人骨肉瘤细胞(MG-63)
眼耳鼻喉口腔系统
+
人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)人眼脉络膜黑色素瘤细胞(OCM-1)人口腔鳞癌细胞(HSC3)人鼻咽癌细胞(C666-1)鼻咽癌细胞(CNE2Z)人鼻咽癌细胞(NPC-43)大鼠穆勒细胞(rmc-1)
生殖系统
+
人卵巢癌细胞(OVCAR-3)人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)人卵巢腺癌细胞(CAOV3)小鼠睾丸间质细胞(TM3)小鼠促性腺激素腺瘤细胞(Lbetat2)人卵巢癌细胞(SK-OV-3)仓鼠卵巢细胞亚株(CHO-K1)小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)人宫颈癌细胞(HeLa 229)人宫颈癌细胞(HeLa)
干细胞
+
人胚胎干细胞(H9)人胚胎干细胞(H1)诱导型多能干细胞 ipsc( ipsc)
 
 

点突变方法Point mutation method

4种解决方案，满足不同突变需求
RNP法
先导编辑器
单碱基编辑器
质粒抗性法
  • 将sgRNA和Cas9蛋自在体外孵育形成RNP复合物，与单链oligo共转进细胞内。RNP造成靶点双链断裂后，oligo可通过同源重组的方式，将携带的目标突变引入基因组靶点。
  • 特点：普遍适用，编辑效率较高，周期较短。
  • 适用类型:突变位点附近(~10bp内)可以找到gRNA序列，细胞可以用电转或脂质体转染。
  • 通过将工程化的逆转录酶与Cas9单切口酶融合，并结合一种特殊的prime editing guide RNA（pegRNA）来实现基因编辑。
  • 特点：可修复多种复杂突变，但编辑效率较低，载体设计复杂。
  • 适用类型：复杂突变，以及突变位点附近无法找到合适的gRNA序列。
  • 将碱基脱氨酶与CRISPR/Cas系统整合开发出的单碱基编辑系统，可在不切断DNA双链的情况下精准引入C/G-T/A及A/T-G/C点突变，从而实现高效精准的基因编辑。
  • 特点：高效，但符合要求的需求较少。
  • 适用类型：满足特定单碱基变换（C⇌T；A⇌G），且只有目标位点在活性窗口内。
  • Donor用质粒构建，在内含子插入一个抗性基因表达盒，通过药筛提高点突变重组效率。
  • 特点：适用突变位点附近无法找到合适gRNA序列的需求，费用较高，周期较长。
  • 适用类型：适用突变位点附近无法找到合适gRNA序列的需求。
RNP法
  • 将sgRNA和Cas9蛋自在体外孵育形成RNP复合物，与单链oligo共转进细胞内。RNP造成靶点双链断裂后，oligo可通过同源重组的方式，将携带的目标突变引入基因组靶点。
  • 特点：普遍适用，编辑效率较高，周期较短。
  • 适用类型:突变位点附近(~10bp内)可以找到gRNA序列，细胞可以用电转或脂质体转染。
先导编辑器
  • 通过将工程化的逆转录酶与Cas9单切口酶融合，并结合一种特殊的prime editing guide RNA（pegRNA）来实现基因编辑。
  • 特点：可修复多种复杂突变，但编辑效率较低，载体设计复杂。
  • 适用类型：复杂突变，以及突变位点附近无法找到合适的gRNA序列。
单碱基编辑器
  • 将碱基脱氨酶与CRISPR/Cas系统整合开发出的单碱基编辑系统，可在不切断DNA双链的情况下精准引入C/G-T/A及A/T-G/C点突变，从而实现高效精准的基因编辑。
  • 特点：高效，但符合要求的需求较少。
  • 适用类型：满足特定单碱基变换（C⇌T；A⇌G），且只有目标位点在活性窗口内。
质粒抗性法
  • Donor用质粒构建，在内含子插入一个抗性基因表达盒，通过药筛提高点突变重组效率。
  • 特点：适用突变位点附近无法找到合适gRNA序列的需求，费用较高，周期较长。
  • 适用类型：适用突变位点附近无法找到合适gRNA序列的需求。
SNP研究离不开点突变细胞？源井4种构建方法分享给你！>>
 

点突变方案Point mutation Strategy

点突变方案

服务流程及质量控制Work Flow and Validation

基因点突变细胞服务流程及质量控制 基因点突变细胞服务流程及质量控制

引用文献精选

A549细胞MYC基因——肺癌
IF=20.8
Nature Metabolism
A549细胞MYC基因——肺癌
IF=20.8 Nature Metabolism
Acetate reprogrammes tumour metabolism and promotes PD-L1 expression and immune evasion by upregulating c-Myc
单位：浙江大学、中国医学科学院
 
摘要：
该研究表明乙酸是人类非小细胞肺癌组织中最丰富的短链脂肪酸，随着肿瘤富集的乙酸摄取增加。研究采用了源井生物构建MYC（p.K148R）点突变的A549细胞，MYC（p.K148Q）点突变的A549细胞，模拟乙酰化和非乙酰化的c-Myc状态，并研究这些改变对肿瘤细胞行为的影响。 查看详情>>
候选驱动基因景观
图1 机理模式图
HEK293细胞FOXP1基因——肿瘤发生
IF=9.4
The EMBO Journal
HEK293细胞FOXP1基因——肿瘤发生
IF=9.4 The EMBO Journal
FOXP1 phosphorylation antagonizes its O-GlcNAcylation in regulating ATR activation in response to replication stress
单位：深圳大学、深圳大学总医院
 
摘要：
该研究揭示了叉头框（forkhead box,FOX）转录因子FOXP1促进复制压力下ATR-CHK1活化的新机制，该功能不依赖于FOXP1的转录调控活性，并且由FOXP1的磷酸化修饰和糖基化修饰交互调控。研究采用了源井生物构建FOXP1基因S396A和S396D点突变HEK293细胞系。
机理模式图
图1 机理模式图
*源井生物交付的所有实验成果及产物仅限于科研使用，不可适用于诊断、治疗、临床及其它用途。

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