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    基因编辑原理Technical Details

CRISPR/Cas9系统是一种原核生物的免疫系统，是细菌用来抵抗病毒和外源质粒入侵的一种防御机制。目前最成熟且应用最广的是Type II的CRISPR/Cas9系统，其原理是利用gRNA特异性识别靶序列，并引导Cas9核酸内切酶对靶序列的PAM上游进行切割，从而造成靶位点DNA双链断裂，随之利用细胞的非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HDR）的方式对切割位点进行修复，实现DNA水平的敲除、敲入或点突变。收起
CRISPR/Cas9系统是一种原核生物的免疫系统，是细菌用来抵抗病毒和外源质粒入侵的一种防御机制。目前最成熟且应用最广的是Type II的CRISPR/Cas9系统，其原理是利用gRNA特异性识别靶序列，并引导Cas9核酸内切酶对靶序列的PAM上游进行切割，从而造成靶位点DNA双链断裂，随之利用细胞的非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HDR）的方式对切割位点进行修复，实现DNA水平的敲除、敲入或点突变。
基因敲除载体Knockout Plasmid

敲除方案Knockout Strategies

源井生物根据客户需求，结合靶基因的情况进行敲除方案设计。
小片段敲除方案小片段敲除方案

gRNA设在外显子2两端的内含子中，敲除外显子编码碱基数为非3倍数，敲除后可造成移码。

移码敲除方案移码敲除方案

gRNA设在外显子上，缺失的碱基数为非3倍数，敲除后可发生移码突变。

大片段敲除方案大片段敲除方案

将整个基因的编码序列敲除，达到大片段敲除的效果。

基因敲除载体分类Classification of knockout gRNA plasmids

源井生物研发的基因敲除系列YKO载体，包括慢病毒载体、普通载体、腺相关病毒载体等，可广泛应用于体外或体内研究。
YKO系列载体 载体名称荧光抗性
慢病毒YKO系列载体 YKO-LV001-single-gRNAEGFP/mCherry可选，Puro/Neo可选
YKO-LV001-dual-gRNAEGFP/mCherry可选，Puro/Neo可选
普通YKO系列载体 YKO-RP001-single-gRNAEGFP/mCherry可选，Puro/Neo
YKO-RP001-dual-gRNAEGFP/mCherry可选，Puro/Neo可选
腺相关病毒YKO系列载体 YKO-AAV001-single-gRNAEGFP/mCherry可选
YKO-AAV001-dual-gRNAEGFP/mCherry可选
单gRNA载体
可应用于移码或片段敲除的方案中，设计2-3个gRNA同时转染细胞， 可提高敲除效率，轻松实现基因敲除。
双gRNA载体
可应用于大片段基因敲除的方案中，设计dual-gRNA构建在一个载体上， 转染细胞，可大大提高细胞转染效率。
质量控制标准
提供载体酶切和测序验证报告。
基因编辑载体应用
针对不同基因编辑对象的应用：不同类型细胞系，斑马鱼及大小鼠等。
*源井生物交付的所有实验成果及产物仅限于科研使用，不可适用于诊断、治疗、临床及其它用途。

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