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基因编辑原理Technical Details

CRISPR/Cas9系统是一种原核生物的免疫系统，是细菌用来抵抗病毒和外源质粒入侵的一种防御机制。目前最成熟且应用最广的是Type II的CRISPR/Cas9系统，其原理是利用gRNA特异性识别靶序列，并引导Cas9核酸内切酶对靶序列的PAM上游进行切割，从而造成靶位点DNA双链断裂，随之利用细胞的非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HDR）的方式对切割位点进行修复，实现DNA水平的敲除、敲入或点突变。收起

基因敲除载体Knockout Plasmid

敲除方案Knockout Strategies

源井生物根据客户需求，结合靶基因的情况进行敲除方案设计。

小片段敲除方案

gRNA设在外显子2两端的内含子中，敲除外显子编码碱基数为非3倍数，敲除后可造成移码。

移码敲除方案

gRNA设在外显子上，缺失的碱基数为非3倍数，敲除后可发生移码突变。

大片段敲除方案

将整个基因的编码序列敲除，达到大片段敲除的效果。

基因敲除载体分类Classification of knockout gRNA plasmids

源井生物研发的基因敲除系列YKO载体，包括慢病毒载体、普通载体、腺相关病毒载体等，可广泛应用于体外或体内研究。

YKO系列载体	载体名称	荧光抗性
慢病毒YKO系列载体	YKO-LV001-single-gRNA	EGFP/mCherry可选，Puro/Neo可选
慢病毒YKO系列载体	YKO-LV001-dual-gRNA	EGFP/mCherry可选，Puro/Neo可选
普通YKO系列载体	YKO-RP001-single-gRNA	EGFP/mCherry可选，Puro/Neo
普通YKO系列载体	YKO-RP001-dual-gRNA	EGFP/mCherry可选，Puro/Neo可选
腺相关病毒YKO系列载体	YKO-AAV001-single-gRNA	EGFP/mCherry可选
腺相关病毒YKO系列载体	YKO-AAV001-dual-gRNA	EGFP/mCherry可选