基因敲除细胞系
根据不同细胞特点选择适宜的转染方法（病毒法，化学转染法或电转法）将gRNA序列和Cas9蛋白转入细胞中，并根据不同的转染方法进行不同时长的药筛。药筛完成后进行单克隆筛选，通过靶位点扩增及测序验证筛选出成功敲除的阳性克隆，最终交付纯合子细胞株与相关数据报告。
KO细胞现货 3500种，低至￥6880，1周达
基因敲除细胞服务详情Knockout
Cell Service Details
| 细胞类型 | 肿瘤细胞、常规细胞系、IPS/ES等各类细胞 |
| 服务类型 | 单基因/多基因敲除 |
| 交付成果 | Cell Pool/纯合子克隆 |
| 周期/价格 | 快至4周，极速构建  在线咨询  添加官方微信号：18054268871（手机同号） |
呼吸系统
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仓鼠肺细胞(V79)人咽鳞癌细胞(FaDu)人支气管上皮细胞(16HBE)人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)人非小细胞肺癌细胞(HCC827)人非小细胞肺癌细胞(NCI-H1299)人肺鳞癌细胞(NCI-H226)人肺鳞癌细胞(SK-MES-1)人肺癌细胞(NCI-H520)人肺癌细胞(Calu-1)人肺癌细胞(A549)
循环系统
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小鼠成肌细胞(C2C12)人冠状动脉内皮细胞株(HCAEC)小鼠心肌细胞(HL-1)大鼠心肌细胞(H9C2)人脐静脉内皮细胞(HUVEC)
内分泌系统
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人乳腺癌细胞(MCF7)小鼠胰岛素瘤β细胞(NIT-1)人乳腺癌细胞(JIMT-1)人乳腺管癌细胞(T-47D)人原位胰腺腺癌细胞(BxPC-3)小鼠胰腺腺泡细胞(266-6)人前列腺癌细胞(VCaP)人胰腺癌细胞(MIA PaCa-2)小鼠髓样乳腺癌细胞(E0771)小鼠胰腺癌细胞(Pan02)人转移胰腺腺癌细胞(AsPC-1)人乳腺腺癌细胞(SK-BR-3)人胰腺癌细胞(PANC-1)小鼠乳腺癌细胞(4T1)人乳腺癌细胞(ZR-75-1)人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)
脑和神经系统
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人胶质瘤细胞(U251MG)小鼠小胶质细胞(BV2)人脑微血管内皮细胞(hCMEC/D3)小鼠颅顶前骨细胞亚克隆(MC3T3-E1 Subclone 14)人脑星形胶质母细胞瘤(U-87 MG)大鼠胶质瘤细胞(C6)小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a)人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH)
血液，淋巴系统
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人B淋巴瘤细胞(Su-DHL-4)弥漫大B细胞淋巴瘤细胞(OCI-LY3)人弥漫大B淋巴瘤细胞(U2932)人急性非B非T淋巴细胞白血病(Reh)人慢性髓原白血病细胞(K-562)人白血病T淋巴细胞(Jurkat, Clone E6-1)大鼠嗜碱性细胞白血病细胞(RBL-2H3)人单核细胞白血病细胞(THP-1)猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)
泌尿系统
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小鼠前列腺癌细胞(RM-1)大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC-12)远端肾单位细胞(Distal nephron cell line（JU4s）)狗肾细胞(MDCK)人前列腺癌细胞(22RV1)人胚肾细胞(293T)人胚肾细胞(HEK293)人膀胱移行细胞癌细胞(T24)人膀胱癌细胞(5637)人膀胱癌细胞(TCCSUP)
消化系统
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人结肠腺癌细胞(LS174T)猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)人肝癌细胞(HepaRG)小鼠肝癌细胞(Hepa 1-6)小鼠肝癌细胞(H22)人肝癌细胞(SMMC-7721)人肾癌细胞(ACHN)非洲绿猴肾细胞(Vero)人肾透明细胞腺癌细胞(786-0)人食管鳞癌细胞(KYSE-30)人食管鳞癌细胞(KYSE-150)人胃腺癌细胞(AGS)人胃癌细胞(SGC-7901)人胃癌细胞(HGC-27)人肝胆管癌细胞(RBE)人肝癌细胞(HuH-7)人肝癌细胞(Hep3B)人肝癌细胞(Hep G2)人正常肝细胞(L-02)人结肠腺癌肺转移细胞(T84)人结直肠腺癌细胞(Caco-2)人结直肠腺癌细胞(NCI-H716)人结直肠腺癌上皮细胞(DLD-1)小鼠结肠癌细胞(CT26.WT)小鼠结肠癌细胞(MC38)人结肠癌细胞(COLO 205)人结肠腺癌细胞(RKO)人结肠癌细胞(HT-29)人结肠癌细胞(SW620)人结肠癌细胞(SW480)人结肠癌细胞株(HCT 116)
骨、关节、软组织、 皮肤系统
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小鼠骨样细胞(MLO-Y4)成釉细胞瘤(hTERT-AM)小鼠鳞状细胞癌细胞(SCC7)小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/0-Ag14)人皮肤鳞癌细胞(A431)小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10)人黑色素瘤细胞(M14)人恶性黑色素瘤细胞(A-375)人纤维肉瘤(HT-1080)人骨肉瘤细胞(U-2 OS)人骨肉瘤细胞(MG-63)
眼耳鼻喉口腔系统
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人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)人眼脉络膜黑色素瘤细胞(OCM-1)人口腔鳞癌细胞(HSC3)人鼻咽癌细胞(C666-1)鼻咽癌细胞(CNE2Z)人鼻咽癌细胞(NPC-43)大鼠穆勒细胞(rmc-1)
生殖系统
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人卵巢癌细胞(OVCAR-3)人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)人卵巢腺癌细胞(CAOV3)小鼠睾丸间质细胞(TM3)小鼠促性腺激素腺瘤细胞(Lbetat2)人卵巢癌细胞(SK-OV-3)仓鼠卵巢细胞亚株(CHO-K1)小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)人宫颈癌细胞(HeLa 229)人宫颈癌细胞(HeLa)
干细胞
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人胚胎干细胞(H9)人胚胎干细胞(H1)诱导型多能干细胞 ipsc( ipsc)
CRISPR-U™技术优势CRISPR-U™ technical advantages
更高的基因切割效率与
同源重组效率，基因编辑
效率提升10-20倍
大量成功案例，
在超200种细胞中成功实现超5000次基因编辑
基因敲除细胞方案Knockout
Cell Strategies
源井生物根据客户需求，结合靶基因的情况进行基因敲除方案设计。
小片段敲除方案 gRNA设在外显子2两端的内含子中，敲除外显子编码碱基数为非3倍数，敲除后可造成移码。
移码敲除方案 gRNA设在外显子上，缺失的碱基数为非3倍数，敲除后可发生移码突变。
大片段敲除方案 将整个基因的编码序列敲除，达到大片段敲除的效果。
服务流程及质量控制Work
Flow and Validation
KO引用文献精选
摘要：
该研究完成了中国人群肝细胞癌全基因组深度特征分析，还选取了3个新鉴定的潜在驱动事件进行详细功能验证，发现上述基因的突变足以导致基因表达水平的显著变化
（其中PPP1R12B,KCNJ12,FGA基因敲除细胞和携带突变位点的过表达慢病毒均由源井生物构建），并参与调控肝细胞癌的多种恶性表型，这些结果证实基于数据分析发现的新驱动事件的有效性。
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候选驱动基因景观
摘要：
为了深入研究cGAS活性调节机制对于预防和治疗病毒性疾病的作用，山东大学赵伟
[1]教授课题组采用
源井生物构建的敲除STING1基因的HeLa细胞 系作为关键模型，发现DNA的两种构象（B-DNA及Z-DNA）与cGAS亲和力不同；内源性代谢小分子精胺和亚精胺及多胺分解代谢关键酶SAT1通过诱导DNA构象转换调节cGAS活性。该研究揭示了一种防止细胞DNA异常识别的新机制，并为治疗cGAS活性异常相关疾病提供了治疗靶点。
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多胺代谢通过控制Z-DNA形成调节cGAS活性模式图
摘要：
该研究采用
源井生物构建的敲除TP53基因的HCT116细胞系，通过解析p53与抗凋亡蛋白BCL-2的复合物晶体结构，并结合生化与细胞实验，揭示了p53与BCL-2蛋白相互作用并促进细胞凋亡的新机制，即p53通过直接占据BCL-2的BH3结合口袋与之形成复合物，并通过释放位于口袋的促凋亡BCL-2家族蛋白来拮抗BCL-2活性，从而促进细胞凋亡
[2]。这些结构和功能数据为进一步了解p53介导的线粒体凋亡的复杂调控机制提供了新的思路，也为研发靶向蛋白质间相互作用激活细胞凋亡的抗癌治疗策略提供了重要基础。
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p53与BCL-2相互作用的突变会降低细胞凋亡
摘要：
ZNF蛋白被证实为调节哺乳动物细胞基因组完整性的关键因子，为探究ZFP可作为基于同源重组(HR)的DNA修复效应器的可能性，拉瓦尔大学Jean-Yves Masson
[3] 团队采用
源井构建的U2OS敲除ZNF432细胞系进行了一系列实验，发现ZNF432在癌细胞中缺失会加速DNA修复，导致PARPi作用减弱，使卵巢癌细胞产生耐药性，证实ZNF432是一种新的HR抑制因子，成功拓宽了研究PARPi疗效的新途径。
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调控ZNF432表达量影响卵巢癌细胞耐药性
摘要：
该研究构揭示了小核仁RNA SNORD17和p53信号通路在肝细胞癌的中的调控作用，为肝细胞癌的治疗提供了一个新的潜在靶点
[5] 。源井生物为本研究提供关键细胞模型：
SNORD17基因敲除的Hep G2细胞，通过体外和体内实验表明，在HCC细胞系敲除SNORD17基因可显著抑制细胞增殖、克隆形成和G1/S期转变。
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p53介导SNORD17对HCC细胞生长的影响
摘要：
该文章通过
源井生物构建的Pik3r1基因RAW264.7细胞敲除模型 ，结合大量的体内外实验探索了GSTP1重塑破骨细胞相关骨稳态的一种全新机制，第一次诠释了破骨细胞的细胞命运是由GSTP1介导的氧化还原相关的翻译后修饰-自噬流级联轴来决定的
[4]。
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GSTP1 介导的Pik3r1谷胱甘肽化调节破骨细胞生成
参考文献：
[1]Zhao C, Ma Y, Zhang M, et al. Polyamine metabolism controls B-to-Z DNA transition to orchestrate DNA
sensor cGAS activity[J]. Immunity, 2023, 56(11): 2508-2522. e6.
[2]Wei H, Wang H, Wang G, Qu L, Jiang L, Dai S, Chen X, Zhang Y, Chen Z, Li Y, Guo M, Chen Y. Structures
of p53/BCL-2 complex suggest a mechanism for p53 to antagonize BCL-2 activity. Nat Commun. 2023 Jul
18;14(1):4300.
[3]O’Sullivan J, Kothari C, Caron M C, et al. ZNF432 stimulates PARylation and inhibits DNA resection to
balance PARPi sensitivity and resistance[J]. Nucleic Acids Research, 2023, 51(20): 11056-11079.
[4]Zhu Y, Zhang Y, Fan Z, et al. Silica Nanoparticles Trigger Chaperone HSPB8‐Assisted Selective
Autophagy via TFEB Activation in Hepatocytes[J]. Small, 2023, 19(5): 2204310.
[5]Liang J, Li G, Liao J, et al. Non-coding small nucleolar RNA SNORD17 promotes the progression of
hepatocellular carcinoma through a positive feedback loop upon p53 inactivation[J]. Cell Death &
Differentiation, 2022, 29(5): 988-1003.
应用案例Case
Study
Hep G2细胞中敲除SNORD17基因，会加速肝癌细胞的凋亡
Non-coding small nucleolar RNA SNORD17 promotes the
progression of hepatocellular carcinoma through a positive feedback loop upon p53 inactivation
（IF2020=15.8）点此阅读完整文献解读>>
客户利用SNORD17基因敲除的Hep
G2细胞（源井生物构建）和SNORD17基因敲降的SK-Hep1细胞（图1 A）对SNORD17在肝癌细胞中的作用做进一步研究，发现在肝癌细胞中SNORD17基因的敲除和敲降均可显著抑制细胞增殖、克隆形成和G1/S期转变，加速肝癌细胞的凋亡（图1 B~F）。利用Hep G2-SNORD17敲除细胞建立了皮下异种移植瘤模型，结果表明在HepG2细胞中敲除SNORD17会显著降低原位肝肿瘤体积和重量（图1 G）。该研究构揭示了小核仁RNA SNORD17在肝癌细胞的中的调控作用，为肝癌的治疗提供了一个新的潜在靶点。
源井基于自身丰富的基因编辑经验，现已建立了3500+KO细胞现货库，涵盖细胞种类200多种、基因数量3000多个，覆盖26条信号通路、5大类药物靶点，以及肿瘤癌症为主的27种疾病类型。如您有KO需求，点击了解更多详情>>
图1 SNORD17在体内和体外均能加速肝癌细胞的凋亡
上述所使用的HepG2-SNORD17-/-敲除细胞是由源井生物采用双gRNA法与独家CRISPR-U™专利技术对SNORD17全长序列进行了敲除，最终构建的HepG2-SNORD17-/-敲除细胞被用于研究SNORD17在HCC中的作用。源井基于自身丰富的基因编辑经验，利用独家CRISPR-U™专利技术构建了包含近3500种的KO细胞现货库，覆盖数千种基因，欢迎点击入库搜索>>
Reference
[1] Liang, Junnan, et al. "Non-coding small nucleolar RNA SNORD17 promotes the
progression of hepatocellular carcinoma through a positive feedback loop upon p53 inactivation." Cell
Death & Differentiation 29.5 (2022): 988-1003.
CRISPR基因编辑技术服务
红棉 · 基因敲除计划
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