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基因编辑原理Technical Details
CRISPR/Cas9系统是一种原核生物的免疫系统,是细菌用来抵抗病毒和外源质粒入侵的一种防御机制。目前最成熟且应用最广的是Type II的CRISPR/Cas9系统,其原理是利用gRNA特异性识别靶序列,并引导Cas9核酸内切酶对靶序列的PAM上游进行切割,从而造成靶位点DNA双链断裂,随之利用细胞的非同源末端连接(NHEJ)或同源重组(HDR)的方式对切割位点进行修复,实现DNA水平的敲除、敲入或点突变。收起
CRISPR/Cas9系统是一种原核生物的免疫系统,是细菌用来抵抗病毒和外源质粒入侵的一种防御机制。目前最成熟且应用最广的是Type II的CRISPR/Cas9系统,其原理是利用gRNA特异性识别靶序列,并引导Cas9核酸内切酶对靶序列的PAM上游进行切割,从而造成靶位点DNA双链断裂,随之利用细胞的非同源末端连接(NHEJ)或同源重组(HDR)的方式对切割位点进行修复,实现DNA水平的敲除、敲入或点突变。
基因敲入载体Knockin plasmid
基因敲入方案Knockin strategy
gRNA和Cas9复合物造成靶位点DNA双链断裂后,细胞以外源携带敲入片段的Donor作为模板进行同源重组修复(HDR),将敲入片段重组到基因组靶位点。
基因敲入载体图谱Knockin plasmid design
双gRNA载体(含cas9)+Donor 载体
质量控制标准
提供载体酶切和测序验证报告。
基因编辑载体应用
针对不同基因编辑对象:不同类型细胞系,斑马鱼及大小鼠等。
针对不同基因编辑目的:移码敲除,片段敲除,精确敲除,定点突变,片段敲入等,提供对应的gRNA载体和打靶载体供客户选择。

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