基因敲入细胞系

通过核转染法将CRISPR/Cas9系统的gRNA载体（含Cas9）与携带目的片段的Donor共转入细胞中，在gRNA和Cas9复合物造成靶位点DNA双链断裂后，细胞以Donor作为模板进行同源重组修复（HDR）实现目的片段的定点敲入。然后利用抗性完成药筛后进行单克隆筛选（若敲入了荧光报告基因也可通过观察荧光进行初步筛选），通过靶位点扩增及测序验证筛选出成功实现靶位点片段敲入的阳性克隆，最终交付阳性克隆与相关数据报告。

基因敲入细胞系服务详情Gene Knockin Cell Line Service Details

细胞类型	肿瘤细胞、常规细胞系、IPS/ES等各类细胞
项目类型	荧光/蛋白标签等
交付成果	Cell Pool/阳性克隆
周期/价格	在线咨询添加官方微信号：18054268871（手机同号）

200+基因编辑成功细胞

呼吸系统

仓鼠肺细胞(V79)人咽鳞癌细胞(FaDu)人支气管上皮细胞(16HBE)人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)人非小细胞肺癌细胞(HCC827)人非小细胞肺癌细胞(NCI-H1299)人肺鳞癌细胞(NCI-H226)人肺鳞癌细胞(SK-MES-1)人肺癌细胞(NCI-H520)人肺癌细胞(Calu-1)人肺癌细胞(A549)

循环系统

小鼠成肌细胞(C2C12)人冠状动脉内皮细胞株(HCAEC)小鼠心肌细胞(HL-1)大鼠心肌细胞(H9C2)

内分泌系统

人乳腺癌细胞(MCF7)小鼠胰岛素瘤β细胞(NIT-1)人乳腺癌细胞(JIMT-1)人乳腺管癌细胞(T-47D)人原位胰腺腺癌细胞(BxPC-3)小鼠胰腺腺泡细胞(266-6)人前列腺癌细胞(VCaP)人胰腺癌细胞(MIA PaCa-2)小鼠髓样乳腺癌细胞(E0771)小鼠胰腺癌细胞(Pan02)人转移胰腺腺癌细胞(AsPC-1)人乳腺腺癌细胞(SK-BR-3)人胰腺癌细胞(PANC-1)小鼠乳腺癌细胞(4T1)人乳腺癌细胞(ZR-75-1)人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)

脑和神经系统

人胶质瘤细胞(U251MG)小鼠小胶质细胞(BV2)人脑微血管内皮细胞(hCMEC/D3)小鼠颅顶前骨细胞亚克隆(MC3T3-E1 Subclone 14)人脑星形胶质母细胞瘤(U-87 MG)大鼠胶质瘤细胞(C6)小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a)人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH)

血液，淋巴系统

人B淋巴瘤细胞(Su-DHL-4)弥漫大B细胞淋巴瘤细胞(OCI-LY3)人弥漫大B淋巴瘤细胞(U2932)人急性非B非T淋巴细胞白血病(Reh)人慢性髓原白血病细胞(K-562)人白血病T淋巴细胞(Jurkat, Clone E6-1)大鼠嗜碱性细胞白血病细胞(RBL-2H3)人单核细胞白血病细胞(THP-1)猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)

泌尿系统

小鼠前列腺癌细胞(RM-1)大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC-12)远端肾单位细胞(Distal nephron cell line（JU4s）)狗肾细胞(MDCK)人前列腺癌细胞(22RV1)人胚肾细胞(293T)人胚肾细胞(HEK293)人膀胱移行细胞癌细胞(T24)人膀胱癌细胞(5637)人膀胱癌细胞(TCCSUP)

消化系统

人结肠腺癌细胞(LS174T)猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)人肝癌细胞(HepaRG)小鼠肝癌细胞(Hepa 1-6)小鼠肝癌细胞(H22)人肝癌细胞(SMMC-7721)人肾癌细胞(ACHN)非洲绿猴肾细胞(Vero)人肾透明细胞腺癌细胞(786-0)人食管鳞癌细胞(KYSE-30)人食管鳞癌细胞(KYSE-150)人胃腺癌细胞(AGS)人胃癌细胞(SGC-7901)人胃癌细胞(HGC-27)人肝胆管癌细胞(RBE)人肝癌细胞(HuH-7)人肝癌细胞(Hep3B)人肝癌细胞(Hep G2)人正常肝细胞(L-02)人结肠腺癌肺转移细胞(T84)人结直肠腺癌细胞(Caco-2)人结直肠腺癌细胞(NCI-H716)人结直肠腺癌上皮细胞(DLD-1)小鼠结肠癌细胞(CT26.WT)小鼠结肠癌细胞(MC38)人结肠癌细胞(COLO 205)人结肠腺癌细胞(RKO)人结肠癌细胞(HT-29)人结肠癌细胞(SW620)人结肠癌细胞(SW480)人结肠癌细胞株(HCT 116)

骨、关节、软组织、皮肤系统

小鼠骨样细胞(MLO-Y4)成釉细胞瘤(hTERT-AM)小鼠鳞状细胞癌细胞(SCC7)小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/0-Ag14)人皮肤鳞癌细胞(A431)小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10)人黑色素瘤细胞(M14)人恶性黑色素瘤细胞(A-375)人纤维肉瘤(HT-1080)人骨肉瘤细胞(U-2 OS)人骨肉瘤细胞(MG-63)

眼耳鼻喉口腔系统

人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)人眼脉络膜黑色素瘤细胞(OCM-1)人口腔鳞癌细胞(HSC3)人鼻咽癌细胞(C666-1)鼻咽癌细胞(CNE2Z)人鼻咽癌细胞(NPC-43)大鼠穆勒细胞(rmc-1)

生殖系统

人卵巢癌细胞(OVCAR-3)人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)人卵巢腺癌细胞(CAOV3)小鼠睾丸间质细胞(TM3)小鼠促性腺激素腺瘤细胞(Lbetat2)人卵巢癌细胞(SK-OV-3)仓鼠卵巢细胞亚株(CHO-K1)小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)人宫颈癌细胞(HeLa 229)人宫颈癌细胞(HeLa)

干细胞

人胚胎干细胞(H9)人胚胎干细胞(H1)诱导型多能干细胞 ipsc( ipsc)

CRISPR-U™技术优势CRISPR-U™ technical advantages

更高的基因切割效率与同源重组效率，基因编辑效率提升10-20倍

大量成功案例，在超200种细胞中成功实现超5000次基因编辑

应用广泛，轻松实现基因敲除/点突变/敲入

承诺项目失败全额退款，成功保障安全无忧

敲入方案Knockin Strategies

特定位点融合蛋白

gRNA和Cas9复合物造成靶位点DNA双链断裂后，细胞以外源携带敲入片段的Donor作为模板进行同源重组修复（HDR），将敲入片段重组到基因组靶位点。

敲除特定基因同时敲入外来基因片段：

服务流程及质量控制Work Flow and Validation

应用案例Case Study

携带嵌合抗原受体（CARs）的T细胞可以介导肿瘤排斥反应，是治疗B细胞恶性肿瘤的有效方法。通过CRISPR-Cas9技术，在T细胞中，利用Donor载体同源重组将具有CD19特异性的CAR片段替代TRAC基因，不仅可以在人外周血T细胞中获得均匀的CAR表达，而且还可以增强T细胞的免疫应答能力。

CRISPR/Cas9靶向CAR基因整合入TRAC位点。
1928z是具有CD19特异性的CAR片段

TCR/CAR流式图
Cas9，gRNA 和donor同时存在时，4天后能检测到敲入蛋白CAR的表达。

Reference：

Eyquem, J., Mansilla-Soto, J., Giavridis, T., van der Stegen, S. J., Hamieh, M., Cunanan, K. M., ... & Sadelain, M. (2017). Targeting a CAR to the TRAC locus with CRISPR/Cas9 enhances tumour rejection. Nature, 543(7643), 113.