基因敲除斑马鱼技术

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斑马鱼,是一种热带淡水鱼,原生于喜马拉雅地区,体色为银色或金色,侧面覆盖着五条横纹,这些横纹从头部延伸至尾鳍的后端,臀鳍和尾鳍上同样也有这种条纹,这些条纹与斑马条纹看起来相似,因而得名。斑马鱼是一种广受欢迎的观赏鱼,同时在科研领域也是一种重要且普遍应用的模式动物,尤其在生物体再生能力的研究方面,已有多种基因编辑后的转基因人工培育种。


斑马鱼

斑马鱼


斑马鱼不同发育阶段

斑马鱼不同发育阶段


斑马鱼作为模式动物,具有以下诸多优势:

1. 斑马鱼实验为整体动物研究,相比体外细胞实验,更能模拟一些复杂的生物过程。

2. 斑马鱼个体小,繁殖能力强,产卵量大,利于统计分析,适用于高通量研究。

3. 斑马鱼全基因组测序已经完成,且与人类基因相似度高,其基因编辑方法也已非常成熟。

4. 斑马鱼胚胎发育迅速,胚胎较大,突出且透明,还可以在母体外发育,便于进行多种操作,且易于观察,研究结果直观。

5. 斑马鱼项目周期短,成本低。

6. 斑马鱼实验伦理风险比较低,研究可以快速开展。

 

※源井生物可为客户提供优质的斑马鱼基因敲除技术服务及斑马鱼转基因技术服务。


1、技术原理:

源井生物采用CRISPR/Cas9技术对斑马鱼进行基因敲除,CRISPR/Cas9系统的工作原理是crRNA(CRISPR-derivedRNA)通过碱基配对与tracr-RNA(trans-activatingRNA)结合形成tracrRNA/crRNA复合物,该复合物引导核酸酶Cas9蛋白在与crRNA配对的序列靶位点剪切双链DNA。而通过人工设计这两种RNA,可以改造形成具有引导作用的sgRNA,以引导Cas9对DNA特点位点的切割。


Cas9蛋白具有两个核酸酶结构域,NHN(切割与crRNA互补的链)和RuvC(切割非互补链),可以分别切割DNA两条单链,造成DNA双链断裂,触发机体紧急修复。DNA双链断裂的修复,包括同源介导的修复(Homology Directed Repair, HDR)和非同源末端连接(Non homologous End Joining,NHEJ)两种。其中,NHEJ修复极易出现错误,导致碱基的缺失或插入,致使目的基因移码失活,从而达到基因敲除的目的。


DNA双链断裂后的修复

DNA双链断裂后的修复

 

2、技术优势:

源井生物技术团队拥有多年的基因编辑经验,成功率高,周期短,售后服务完善。


3、应用:

基因功能研究;疾病模型构建;药物筛选等

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