干货分享 | 贴壁细胞转染小技巧

干货分享 | 贴壁细胞转染小技巧

在细胞生物学研究中，贴壁细胞（如原代细胞、干细胞、神经元等）的基因操作常常面临两个主要难点：转染效率低和细胞存活率差。针对这些挑战，目前常见的转染方法包括三种：脂质体转染法、电转染法和慢病毒转染法。三者各有特点，选择取决于细胞类型、实验周期以及预期目的。其中，电转染（Electroporation）因其在处理难转染细胞方面的高效性，受到越来越多科研人员的青睐。今天，小源就来为大家分享一套实用的电穿孔转染全攻略，带您一步步突破贴壁细胞转染的技术壁垒，实现高效率、高生存率的转染目标！

电转染（Electroporation）是一种借助短暂的电脉冲在细胞膜上打孔，使外源核酸（如质粒 DNA、siRNA、mRNA等）快速穿透细胞膜并进入胞内的高效转染技术。相比传统脂质体法，电穿孔对原代细胞、神经元、干细胞等难转染的贴壁细胞具有显著优势，能在提升转染效率的同时保留较好的细胞活性，但对操作流程和参数设定的要求更高。

优势概览：

• · 高效性：显著提升多种核酸类型的细胞内递送效率；
• · 通用性：适配范围广，适用于大多数贴壁细胞类型；
• · 可控性：电压、脉冲宽度、次数等可灵活调整，优化效率与细胞生存率。

• 1. 细胞状态：转染前，确保细胞处于最佳状态，细胞处于对数生长期，汇合度在70-90%（不同细胞系可能有差异），细胞无空泡，无污染。
• 2. 培养基预热：提前将所需完全培养基加入相应孔板或培养瓶，置于 37℃、5%CO₂培养箱中预热，以便电转后立即接种使用。
• 3. 细胞消化与收集：使用温和胰酶（含 EDTA）消化，37℃孵育约 2~5分钟，细胞开始收缩脱落即可停止；加入预热培养基终止消化，轻柔吹打后转移离心管，尽量减少机械损伤。
• 4. 计数与活率检测：细胞消化后细胞悬液计数活率大于80%以上（个别细胞可放低要求）。活率低的样本可能需要优化复苏流程或调整培养时间

• 1. 控制细胞密度和DNA用量，通常100ul电转体系使用1×10⁶个cell进行电转，细胞密度过高或过低都会导致转染效率降低；DNA浓度过高可能导致细胞毒性增加，降低细胞存活率，DNA浓度过低则可能导致进入细胞的DNA有限，无法达到理想的转染率。
• 2. 电转参数的选择，查阅文献或试剂说明书推荐参数，也可梯度测试（如电压从低到高），电压过高可能造成细胞膜破裂，细胞死亡，电压过低则可能无法击穿细胞膜或击穿的孔洞较少，影响转染效率。
• 3. 电转后的细胞较为脆弱，应减少吹打细胞，轻柔转移至已预热好的培养基中，摇晃均匀，静置培养。

如果你在细胞转染过程中还遇到各种疑问或操作上的难题，比如转染效率低、细胞状态差、参数设置不理想等，别担心！你不是一个人在战斗！欢迎联系小源，我们将根据您的细胞类型、实验目标和现有条件，为您量身定制转染解决方案，包括实验设计、试剂推荐、参数优化和操作指导等，助您高效突破技术瓶颈，事半功倍完成科研任务！