02 定点突变

Cas9切割目标基因DNA双链产生DSB损伤，然后诱发细胞启动同源重组修复（HDR)，使用带点突变的序列作为供体，通过同源重组的方式替代野生型位点，以造成特定位点的点突变.

通过用Cas9在待突变位点附近断裂双链DNA，此时，若提供同源修复模板供体，而此供体可以引入如保守区域替换片段或加入标签编码序列(如GFP、Flag、HA....)等，则研究者可实现在基因组特定位置的片段敲入。

在CRISPR/Cas9基因编辑中，质粒转进细胞的效率和细胞单克隆生长的能力是影响基因编辑成功的主要因素

CRISPR-U™ 是源井生物自主研发的应用于基因编辑细胞系的独家技术（基于CRISPR / Cas9技术），通过优化基因编辑载体和基因编辑流程，CRISPR-U™ 技术的基因切割效率和重组效率是普通的CRISPR/Cas9技术的10倍以上，轻松实现细胞水平的基因敲除（KO）、基因点突变（PM）和基因敲入（KI）。利用CRISPR-U™ 的技术优势，源井生物已成功在超过100种细胞系上实现基因编辑。