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干货|Jurkat细胞培养与基因编辑Tips来啦！
Jurkat 细胞是一种悬浮细胞，由Schneider建立，来源于一名14岁男孩的外周血。Jurkat, Clone E6-1是Jurkat-FHCRC 细胞株的一个克隆（Jurkat的一个衍生株），经诱导后可产生大量IL-2。同时，该细胞可以表达一系列典型的T淋巴细胞表面标志物和分泌多种细胞因子，因此它也是T细胞免疫功能、白血病、病毒感染和信号传导等研究领域的重要模型细胞。
然而，在Jurkat细胞的培养过程中，可能会遇到一些问题，比如细胞碎片增多、细胞聚团过多的现象，这些都可能影响到实验结果的准确性和细胞状态的稳定性。今天，让我们一起跟随小源老师学习Jurkat细胞的培养和基因编辑技巧吧！
细胞信息：
细胞名称 | Jurkat, Clone E6-1（人白血病T淋巴细胞） |
生长特性 | 悬浮生长，会出现细胞聚团现象 |
细胞形态 | 淋巴细胞状，悬浮生长 |
细胞培养条件 | 90%RPMI-1640+10%FBS； 气相：空气，95%；CO2，5%； 温度：37℃ |
换液频次 | 传代时进行换液 |
传代比例 | 1：3-1：5 |
图1 生长正常的Jurkat细胞
Jurkat细胞培养
复苏步骤：
1) 准备工作：预热水浴锅至37℃，预热完全培养基，准备好细胞
2) 在超净台内吸取 7 mL 已预热好的完全培养基至 15 mL 离心管中
3) 将细胞从干冰里取出，用镊子夹住盖子放入 37℃水浴中快速晃动（注意：水不能没过盖子），使其在 1 分钟左右完全融化
4) 用单道移液器将细胞悬液转移至步骤2）提前准备好的15ml离心管中，盖上盖子，离心1100 rpm 室温 4 分钟；
5) 超净台内弃上清，吸取 1 mL 完全培养基重悬细胞至单细胞悬液，转移至装有 4 mL 完全培养基的 T25 cm2培养瓶 （或者 6cm 的皿） 中，写上细胞名称、复苏日期、 代次，放置 37℃、5% CO2培养箱中培养
6) 第二天观察细胞状态
传代：
离心法：
1）将所有细胞悬液转移至离心管中，1100rpm离心4min
2）离心结束弃上清，用适量完全培养基轻柔混匀细胞，吸取20ul细胞悬液进行细胞计数
3）根据计数结果确定传代比例，将细胞密度调整为 2*10^5~4*10^5个细胞/mL ，视细胞培养体积将细胞培养在不同规格的培养瓶中。
4）置于 5%CO2、37℃培养箱内培养。
半换液法（建议使用）：
1）向培养瓶中加入适量新鲜完全培养基，然后轻柔将细胞吹打混匀
2）按照适当的传代比例将细胞悬液均分到新培养瓶中，每瓶再补充适量的新鲜完全培养基
3）置于 5%CO2、37℃培养箱内培养。
细胞冻存：
1）将培养瓶里的细胞悬液全部转移至离心管中
2）1100rpm离心4min，离心结束弃去上清，加入适量4℃预冷的冻存液重悬细胞，然后吸取20ul细胞悬液进行细胞计数，并调整细胞密度为5*10^6~1*10^7个细胞/mL
3）按 1 mL/管分装至冻存管中，将冻存管放置于冻存盒中然后转移至-80℃冰箱
4）过夜后，将冻存细胞转移至液氮罐内保存
注意事项：
1. 冻存时细胞活率建议大于90%，每管冻存细胞量控制在5*10^6-1*10^7/ml
2. 细胞培养过程中避免频繁离心换液，在细胞状态良好的情况下一般建议使用半换液法进行传代
3. 该细胞对机械力较敏感。正常培养时，可轻柔吹打细胞，尽量避免吹打力度过大而导致细胞分化和造成细胞死亡
4. 培养时控制好细胞密度，培养、传代时让细胞处于一个合适的密度范围
基因编辑Tips
1.培养过程中细胞碎片过多或者药筛后死细胞过多：
图2 Jurkat细胞碎片多且死细胞多
若培养过程中细胞碎片或者死细胞过多，可在细胞进行离心后根据细胞量加入适量PBS重悬，重悬后将细胞悬液转移至1.5mlEP管中低速离心（800rpm离心3min），离心结束尽可能地吸干净PBS，可重复此步骤两次，根据离心下来的细胞量接种至合适的培养皿中。
2.培养过程中细胞聚团：
少量细胞聚团属于正常现象，若聚团过多，可考虑以下处理方法：
1. Jurkat, Clone E6-1细胞对血清质量较为敏感，建议使用优质血清进行培养
2. 控制好细胞密度，不要太稀或者过密，保持细胞密度在合适的范围内
3.冻存复苏活率低（存活率低）：
因为Jurkat, Clone E6-1是悬浮细胞，容易受到冻存的影响，为了提高复苏时细胞存活率需要在冻存时加大冻存密度，一般建议冻存时细胞密度为5*10^6-1*10^7。在复苏时可先把细胞复苏至1-2个6孔，待细胞恢复状态后再转移至更大体积的培养瓶中培养。
4.如何提高单克隆形成率：
1. 铺克隆时细胞活率需要＞90%
2. 稀释细胞计数后结果最好落在1*10^6-2*10^6之间
3. 铺克隆时建议使用优质胎牛血清
4. 铺克隆时建议用PBS清洗两次
5.细胞转染时注意事项：
1. 细胞活率＞90%，细胞状态正常，肉眼看都是圆形透亮、细胞膜完整的细胞
2. 转染过程中操作需轻柔
3. 病毒感染法进行正式实验前建议进行预实验找到最适MOI及最佳药筛浓度；确保感染的病毒滴度达标；感染前添加助染剂Polybrene；感染时建议在24孔板或者12孔板内进行
图3 电转Jurkat细胞
图4 慢病毒感染Jurkat细胞
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