小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10-CAS9)
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小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10-CAS9)
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Cas9稳转株细胞是指通过基因工程手段将Cas9核酸酶基因稳定整合至宿主细胞基因组中，使细胞长期、稳定表达Cas9蛋白的细胞系，是开展CRISPR基因敲除、文库筛选和功能基因组学研究的基础工具细胞。源井生物已构建100余株常见细胞系的Cas9稳转株，仅需转染gRNA即可快速实现基因敲除；共转染gRNA与供体DNA，即可完成基因敲入或点突变。源井生物B16-F10-CAS9细胞株是采用慢病毒法构建，并通过抗生素筛选获得持续稳定高表达的细胞 。B16-F10-CAS9细胞株已进行功能性编辑验证，验证结果显示导入靶基因gRNA后可产生高效DNA切割和indel，适用于在B16-F10细胞中进行基因敲除、gRNA效率验证或CRISPR文库高通量筛选等实验。
质粒图谱
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小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10-CAS9)
产品名称
小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10-CAS9)
表达基因
Cas9
产品货号
YC-A011-Cas9-H
抗体基因
hygro
产品分类
Cas9细胞系
支原体检测
阴性
物种
Mouse
培养体系
90%RPMI-1640+10%FBS
细胞形态
上皮样, 贴壁细胞
储存条件
液氮
发货形式
活细胞：常温运输
冻存管：干冰运输
冻存管：干冰运输
应用说明
本产品仅供进一步科研使用，不得用于诊断治疗、临床及其他用途。
传代比例
1:3~1:4
收录情况
-
背景描述
B16-F10细胞是从C57BL/6J小鼠黑色素瘤中分离出来，呈纺锤形及上皮样细胞形态。B16-F10细胞是B16细胞的克隆亚系之一（B16→B16-F0→B16-F1→B16-F5→B16-F10），具有侵袭性强，成瘤率高等特点，被认为是构建肿瘤模型理想的细胞之一。可用于皮肤癌研究，也是一种合适的转染宿主。
产品优势
使用简单
该类细胞株稳定表达Cas9蛋白，仅需转染gRNA，即可实现基因敲除，而同时转染gRNA和供体DNA，则可实现基因敲入/点突变。
高效敲除
在该类细胞的基础上已成功构建大量基因敲除细胞株，且基因敲除效率均提高5-10倍。
精选细胞
该类细胞株经过优化，代次低、活性高、状态好，适用于各类基因编辑实验。
质量控制规范
1. 细菌和真菌检测
检测结果为阴性
2. 支原体检测
检测结果为阴性
3. STR鉴定
4. Cas9稳转细胞验证数据
1) RT-qPCR
| Sample Name | Target Name | Cт Mean | ΔCт |
|---|---|---|---|
| B16-F10-CAS9 | Cas9 | 21.08352280 | 3.38369179 |
| B16-F10-CAS9 | β-actin | 17.69983101 | |
| B16-F10 | Cas9 | 35.43432236 | 18.75411224 |
| B16-F10 | β-actin | 16.68021011 |
表1. Cas9蛋白mRNA的相对表达量
2) 切割验证
注：上图为在B16-F10-CAS9稳转细胞株上，电转靶向Cd47基因的gRNA质粒，药筛48h后取pool细胞检测的测序峰图。红色箭头标示处为套峰出现的位置，显示靶位点由于发生了切割而导致基因型明显改变，说明Cas9核酸酶成功表达。
图1. Cas9稳转细胞株切割功能验证
注意事项
1) 该细胞株已稳定表达Cas9核酸酶，仅需转染gRNA，即可实现基因敲除，而转染gRNA和供体DNA，则可实现基因敲入/点突变。
2) 转染的gRNA可以是质粒，也可以是合成的或体外转录的sgRNA，转染方法可以选择瞬转（如：脂质体法、电转法），也可以选择稳转（如：慢病毒法）。
3) 细胞系在体外长期培养可能导致部分细胞基因组发生改变，不排除部分改变会降低Cas9的表达。因此，建议使用低代次（10代以内）的细胞进行实验，效果更加。
拆箱和存放说明
1.
细胞接收
2.
细胞处理
细胞复苏、传代及冻存流程概述参考
1.
细胞复苏
2.
细胞传代
3.
细胞冻存
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