【文献解读】miR-302a参与Akt通路介导的血管平滑肌细胞增殖和再狭窄！

【文献解读】miR-302a参与Akt通路介导的血管平滑肌细胞增殖和再狭窄！

人体不同部位的血管狭窄可导致对应区域的由血管支配的器官或组织疾病，如冠状动脉狭窄将导致急性冠状动脉综合征（ACS）等心血管疾病的发生。ACS是一种常见的严重的心血管疾病，是冠心病的一种严重类型，经皮冠状动脉介入治疗(如球囊血管成形术或支架植入术)被作为首选治疗方法，但患者术后再狭窄的风险会增加。过度的平滑肌细胞(SMC)增殖、迁移和侵袭会导致新生内膜增生，被认为是导致再狭窄的重要因素。因此，抑制平滑肌细胞的增生是治疗再狭窄的重要途径。microRNAs (miRNAs)是一个内源性非编码小RNA家族，由18-22个核苷酸组成，通过与其靶mRNA的3 '非翻译区(3'UTR)的不完全互补靶位点配对，可在转录后水平调控基因表达。以往的研究表明，miRNA参与调节SMC的增殖和迁移，其中miR-302a通过抑制不同癌细胞中Akt依赖的细胞增殖而发挥肿瘤抑制作用，表明miR-302a可能负调节Akt的激活。而Akt的缺失已经被证明可以抑制VSMC（VascularSMC，血管平滑肌细胞）的增殖和迁移。

鉴于Akt信号通路在细胞增殖的调节中的重要性，来自中山大学的Ying-ying Liu等研究人员推测miR-302a参与Akt介导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和再狭窄。他们在Acta Pharmacologica Sinica杂志上发表了一篇名为“microRNA-302a promotes neointimal formation following carotid artery injury in mice by targeting PHLPP2 thus increasing Akt signaling”的文章。文章中报告了，他们用miR-302杂合小鼠和miR-302条件性基因敲除小鼠构建的颈动脉损伤模型，研究microRNAs能否以及如何调控小鼠颈动脉损伤后的血管平滑肌细胞增殖和血管重塑。研究证明了在miR-302杂合子小鼠和SMC特异性miR-302基因敲除小鼠中，颈动脉损伤诱导的新生内膜形成显著改善。相反，将miR-302a腺病毒注射到受损的颈动脉可促进新生内膜的形成。miR-302a上调通过促进细胞周期转换促进体外培养的小鼠主动脉平滑肌细胞(MASMC)的增殖和迁移，而miR-302a抑制则产生相反的结果。

miR-302a通过增加Akt活性增强MASMC增殖

miR-302a在MASMCs中通过降低Akt的表达和增加Akt的磷酸化来促进Akt的激活。为了进一步证实miR-302a在VSMC增殖中的调控功能是否需要Akt活性，研究人员用miR-302a模拟物和Akt抑制剂GSK690693在PDGF-BB存在下处理细胞。与miR-302a模拟处理的MASMC相比，经处理GSK690693的细胞增殖和迁移被抑制，而miR-302a上调则增强了这一作用。这些结果显示miR-302a依赖于Akt信号通路调节VSMC增殖（图1）。

图 1

PHLPP2对miR-302在新生内膜的形成中的功能至关重要

他们进一步发现miR-302a直接靶向PH结构域和富含亮氨酸重复蛋白磷酸酶2(PHLPP2)的3‘非翻译区，负调控PHLPP2的表达。恢复PHLPP2的表达可消除miR-302a对Akt激活和MASMC运动的影响。为了进一步评估在体内miR-302调节的再狭窄过程中PHLPP2的作用，富含亮氨酸重复蛋白磷酸酶2(PHLPP2)shRNA的重组腺病毒(Ad-shPHLPP2)（由源井生物提供）被注射到miR-302^+/−小鼠体内。结果表明miR-302基因敲除对新生内膜形成的抑制作用在很大程度上依赖于PHLPP2表达的上调（图2）。源井生物在该研究中所提供的shRNA腺病毒，用于深入研究PHLPP2对miR-302在新生内膜的形成作用。腺病毒的纯度与滴度决定了它的质量与使用途径，源井生物所提供的腺病毒颗粒均经过超速梯度离心和过滤，并通过壳蛋白免疫法进行滴度测定，保证了纯度与精确滴度。目前我们可提供滴度为10^10~10^12pfu/ml的腺病毒，轻松满足各类实验的使用要求。

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图 2

综上所述，研究证明了miR-302a通过靶向其磷酸酶PHLPP2的Akt激活而促进VSMC增殖和随后的新生内膜形成，提示抑制miR-302a可能是治疗再狭窄的一种新策略，而该研究首次证明了PHLPP2是miR-302a的一个新靶点，这将为往后血管再狭窄的治疗提供新思路。

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