IF=37.5|源井KO细胞助力：靶向CMTR激活B细胞免疫，逆转免疫冷肿瘤的纳米新策略
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免疫检查点抑制剂疗效有限，多数低炎症“免疫冷肿瘤”缺乏免疫浸润，现有研究又多聚焦T细胞，B细胞抗肿瘤作用未被充分挖掘。6月12日，哈佛医学院研究团队于Nature Nanotechnology发表新研究，旨在解决免疫冷肿瘤对免疫检查点抑制剂耐药、现有免疫疗法过度侧重T细胞的临床难题。
该研究中的关键 敲除细胞CMTR2 Knockout cell line(A549) 由源井生物提供 ，为研究阐明AT-1965靶向CMTR2调控天然免疫、招募B细胞的完整分子机制提供细胞工具。
研究制备有机铂纳米药物AT-1965，它不损伤DNA，可特异性抑制肿瘤CMTR2酶，使胞内未甲基化RNA蓄积，激活RIG-I抗病毒通路，重塑肿瘤微环境并大量招募功能性B细胞。基因敲除与细胞回输实验证明B细胞是药物起效的关键，其分泌IgM介导ADCC与吞噬杀伤肿瘤，还能诱导长期免疫记忆。临床数据库显示CMTR2高表达提示预后差，肿瘤B细胞浸润与生存期正相关；AT-1965联合PD-1抑制剂可协同抑瘤。 该研究首次提出CMTR2为免疫新靶点，开创靶向表观修饰、激活B细胞以逆转冷肿瘤的治疗思路。
研究路线
- 1.制剂体外评价： 构建并优化AT-1965脂质纳米粒，完成理化表征，在多肿瘤细胞系检测体外药物活性IC50。
- 2.体内药效初筛： 以4T1冷肿瘤小鼠模型，分别在免疫健全、缺陷动物体内验证单药抑瘤能力与长效抗肿瘤免疫记忆。
- 3.免疫细胞表型分析： 借助流式、IHC检测给药后各类肿瘤浸润免疫细胞，初步确定B细胞为药物核心抗肿瘤效应细胞。
- 4.靶点鉴定与机制解析： 双蛋白质组学筛选得到药物靶点CMTR2，结合分子互作、通路实验阐明CMTR2抑制后激活RIG-I抗病毒通路、招募B细胞并依靠IgM杀伤肿瘤的完整分子机制。
- 5.联合药效与临床数据佐证： 体内证实AT-1965与PD-1抑制剂协同抑瘤；利用TCGA数据库分析CMTR2、B细胞标志物与肿瘤患者预后的临床关联。
主要结果
1.AT-1965脂质纳米粒制备、理化表征与体内单药抗肿瘤活性
成功构建理化性质均一、符合静脉给药标准的AT-1965脂质纳米粒；该药物体外直接杀伤肿瘤能力有限，但在4T1三阴性乳腺癌体内模型中具备剂量依赖性抑瘤效果，高剂量可实现近半数肿瘤完全消退，且治疗后机体形成长效抗肿瘤免疫记忆，二次攻瘤无新发肿瘤。
图1.AT-1965纳米脂质体的工程化与表型筛选
2.AT-1965抑瘤不依赖CD4/CD8T细胞应答
AT-1965起效早期不会提升肿瘤CD4、CD8T细胞数量，仅下调免疫抑制性Treg；经典T细胞依赖化疗药奥沙利铂与AT-1965免疫激活通路完全不同；清除体内全部功能性CD4/CD8T细胞后，药物抑瘤作用不受影响，证明AT-1965诱导肿瘤早期消退依靠T细胞以外的免疫细胞。
图2.AT-1965治疗后肿瘤浸润T细胞的特征分析
3.AT-1965显著富集肿瘤浸润功能性B细胞
AT-1965可在转录、蛋白层面大幅上调肿瘤B细胞标志物IGKC，显著增加肿瘤浸润总B细胞；给药后肿瘤内抑制性Breg占比降低，具备抗肿瘤功能的过渡B、滤泡B、记忆B细胞大量增殖，同时脾脏、引流淋巴结内功能性B细胞同步扩增；B细胞增殖、记忆相关基因富集程度与药物抗肿瘤应答直接正相关。
图3.AT-1965治疗可增强B细胞特征性表型
4.遗传/过继细胞实验证实B细胞是AT-1965抗肿瘤必需
过继转移经AT-1965活化的B细胞可独立赋予小鼠抗肿瘤保护；仅敲除B细胞就会完全消除AT-1965的体内抑瘤效果，证明B细胞是药物发挥作用的必要条件；公共临床数据库显示，多种实体瘤中B细胞标志物高表达对应更长生存期，人乳腺癌样本也证实肿瘤内部存在大量浸润B细胞，佐证B细胞的临床抗肿瘤价值。
图4.B细胞介导了AT-1965的抗肿瘤疗效
5.双向蛋白质组筛选并验证CMTR2为AT-1965特异性分子靶点
通过两套独立蛋白质组学手段共同锁定CMTR2为AT-1965的特异性结合蛋白；AT-1965可精准结合CMTR2催化口袋，竞争性抢占底物SAM，抑制CMTR2甲基转移酶活性，且不作用于同源蛋白CMTR2；临床数据库显示CMTR2高表达预示乳腺癌、肺鳞癌患者预后更差，说明CMTR2是促癌不良预后靶点。
图5.CMTR2是AT-1965的分子靶点
6.CMTR2抑制激活RIG-I介导细胞内抗病毒天然免疫通路
AT-1965抑制CMTR2后，肿瘤细胞内未完成Cap2甲基化的Cap1RNA累积，被胞内受体RIG-I识别，逐级上调IRF7、I型干扰素、IFIT1等抗病毒核心分子；体外细胞、体内肿瘤组织均验证该通路显著激活，同时血浆出现IFIT1-RNA复合物形成全身免疫信号；肿瘤组织CMTR2/RIG-I比值高于正常组织，比值越高患者对药物响应越差，可作为疗效预判指标。
图6.AT-1965可在癌细胞中诱导一种新型的病毒防御免疫反应
7.抗病毒微环境招募B细胞、IgM介导肿瘤细胞清除
CMTR2抑制形成的肿瘤类病毒微环境诱导B细胞早期分泌大量天然IgM，IgG无明显变化；IgM可特异性结合携带未甲基化RNA的应激肿瘤细胞，标记肿瘤细胞；药物处理后肿瘤内活化MHC-II巨噬细胞增多，依靠IgM介导ADCC与吞噬作用清除肿瘤；AT-1965与PD-1抑制剂联用可同时激活B、T细胞通路，大幅提升肿瘤完全缓解率，存在显著协同抗肿瘤作用。
图7.由B细胞驱动的先天性与适应性抗病毒免疫反应
研究创新点
- 靶点新发现：首次将 mRNA帽甲基转移酶CMTR2 确立为肿瘤免疫治疗靶点，揭示CMTR2通过掩盖肿瘤内类病毒RNA抑制天然免疫，为表遗传抗肿瘤开辟全新通路；
- 免疫范式革新：打破肿瘤免疫只关注T细胞的固有思路，证明B细胞是逆转冷肿瘤的核心效应细胞，阐明“肿瘤细胞内抗病毒信号→招募浸润B细胞”全新级联机制；
- 纳米药物转化优势：铂有机AT-1965纳米制剂，铂不解离、无传统铂类DNA毒性，靶向肿瘤、全身毒性低，同时诱导短期免疫激活、不产生持续炎症损伤；
- 临床标志物价值：证实CMTR2表达、CMTR2/RIG-I比值、IGKC（B细胞标记）可作为肿瘤预后与药物疗效预测标志物；
- 联合治疗潜力：CMTR2抑制剂与PD-1检查点抑制剂协同，同时激活B细胞体液免疫与T细胞细胞免疫，大幅提升冷肿瘤缓解率。
文章小结
本研究构建铂有机小分子脂质纳米制剂AT-1965，靶向肿瘤CMTR2并抑制其mRNA帽甲基转移酶活性，造成未修饰Cap1RNA蓄积、激活RIG-I介导胞内抗病毒天然免疫通路；该通路重塑肿瘤微环境，大量募集滤泡与记忆型功能性B细胞，分泌IgM介导ADCC与吞噬杀伤肿瘤， 多重基因敲除、B细胞过继回输证实B细胞是AT-1965发挥抑瘤作用的核心，药物可建立长效抗肿瘤免疫记忆 ；CMTR2高表达提示肿瘤不良预后，AT-1965联合PD-1抑制剂存在协同抗肿瘤效果，本研究首次将CMTR2确立为免疫新靶点，为难治免疫冷肿瘤提供靶向表观转录修饰、激活B细胞的纳米免疫治疗新策略。
源井生物提供的支持
在本研究中，源井生物提供的 CMTR2 Knockout cell line(A549)细胞 被应用于证明AT-1965起效完全依赖CMTR2，并完整建立「CMTR2抑制→Cap1RNA蓄积→RIG-I激活」的分子因果链，排除药物脱靶干扰，为研究明确CMTR2为免疫新靶点提供关键细胞模型。
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