非洲绿猴肾细胞(Vero-CAS9)
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非洲绿猴肾细胞(Vero-CAS9)
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Cas9稳转株细胞是指通过基因工程手段将Cas9核酸酶基因稳定整合至宿主细胞基因组中，使细胞长期、稳定表达Cas9蛋白的细胞系，是开展CRISPR基因敲除、文库筛选和功能基因组学研究的基础工具细胞。源井生物已构建100余株常见细胞系的Cas9稳转株，仅需转染gRNA即可快速实现基因敲除；共转染gRNA与供体DNA，即可完成基因敲入或点突变。源井生物Vero-CAS9细胞株是采用慢病毒法构建，并通过抗生素筛选获得持续稳定高表达的细胞 。Vero-CAS9细胞株已进行功能性编辑验证，验证结果显示导入靶基因gRNA后可产生高效DNA切割和indel，适用于在Vero细胞中进行基因敲除、gRNA效率验证或CRISPR文库高通量筛选等实验。
质粒图谱
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非洲绿猴肾细胞(Vero-CAS9)
产品名称
非洲绿猴肾细胞(Vero-CAS9)
表达基因
Cas9
产品货号
YC-A001-Cas9-H
抗体基因
hygro
产品分类
Cas9细胞系
支原体检测
阴性
物种
Green monkey
培养体系
90% DMEM+10%FBS
细胞形态
上皮样, 贴壁细胞
储存条件
液氮
发货形式
活细胞：常温运输
冻存管：干冰运输
冻存管：干冰运输
应用说明
本产品仅供进一步科研使用，不得用于诊断治疗、临床及其他用途。
传代比例
1:2~1:4
收录情况
-
背景描述
Vero细胞株是日本千叶大学的Y. Yasumura和Y. Kawakita从正常成年非洲绿猴的肾脏建株的。1964年6月15日B. Simizu将其从千叶大学带到国立健康研究所(NIH)国立过敏及传染病研究所热带病毒实验室时，已传至第93代。可用于生产人用病毒疫苗。
产品优势
使用简单
该类细胞株稳定表达Cas9蛋白，仅需转染gRNA，即可实现基因敲除，而同时转染gRNA和供体DNA，则可实现基因敲入/点突变。
高效敲除
在该类细胞的基础上已成功构建大量基因敲除细胞株，且基因敲除效率均提高5-10倍。
精选细胞
该类细胞株经过优化，代次低、活性高、状态好，适用于各类基因编辑实验。
质量控制规范
1. 细菌和真菌检测
检测结果为阴性
2. 支原体检测
检测结果为阴性
3. Cas9稳转细胞验证数据
1) RT-qPCR
| Sample Name | Target Name | Cт Mean | ΔCт |
|---|---|---|---|
| Vero-CAS9 | Cas9 | 20.27149773 | 3.42999840 |
| Vero-CAS9 | β-actin | 16.84149933 | |
| Vero | Cas9 | 36.17840576 | 19.83103370 |
| Vero | β-actin | 16.34737206 |
表1. Cas9蛋白mRNA的相对表达量
2) 切割验证
注：上图为在Vero-CAS9稳转细胞株上，电转靶向ATG16L1基因的gRNA质粒，药筛48h后取pool细胞检测的测序峰图。红色箭头标示处为套峰出现的位置，显示靶位点由于发生了切割而导致基因型明显改变，说明Cas9核酸酶成功表达。
图1. Cas9稳转细胞株切割功能验证
注意事项
1) 该细胞株已稳定表达Cas9核酸酶，仅需转染gRNA，即可实现基因敲除，而转染gRNA和供体DNA，则可实现基因敲入/点突变。
2) 转染的gRNA可以是质粒，也可以是合成的或体外转录的sgRNA，转染方法可以选择瞬转（如：脂质体法、电转法），也可以选择稳转（如：慢病毒法）。
3) 细胞系在体外长期培养可能导致部分细胞基因组发生改变，不排除部分改变会降低Cas9的表达。因此，建议使用低代次（10代以内）的细胞进行实验，效果更加。
拆箱和存放说明
1.
细胞接收
2.
细胞处理
细胞复苏、传代及冻存流程概述参考
1.
细胞复苏
2.
细胞传代
3.
细胞冻存
参考文献
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