小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3-CAS9)
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Cas9稳转株细胞是指通过基因工程手段将Cas9核酸酶基因稳定整合至宿主细胞基因组中，使细胞长期、稳定表达Cas9蛋白的细胞系，是开展CRISPR基因敲除、文库筛选和功能基因组学研究的基础工具细胞。源井生物已构建100余株常见细胞系的Cas9稳转株，仅需转染gRNA即可快速实现基因敲除；共转染gRNA与供体DNA，即可完成基因敲入或点突变。源井生物NIH/3T3-CAS9细胞株是采用慢病毒法构建，并通过抗生素筛选获得持续稳定高表达的细胞 。NIH/3T3-CAS9细胞株已进行功能性编辑验证，验证结果显示导入靶基因gRNA后可产生高效DNA切割和indel，适用于在NIH/3T3细胞中进行基因敲除、gRNA效率验证或CRISPR文库高通量筛选等实验。
质粒图谱
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冻存管：干冰运输
NIH/3T3 是从小鼠 NIH/Swiss 胚胎中分离出来的成纤维细胞系。该细胞系对肉瘤病毒病灶形成和白血病病毒繁殖高度敏感，并已被证明在 DNA 转染研究中非常有用。NIH/3T3细胞与原始的随机交配3T3和近交系BALB/c 3T3建株方法一样，NIH/3T3细胞是从NIH Swiss小鼠胚胎培养物中建立的高度接触抑制的连续细胞株。为了培育在形态学特征上更适合于进行转化分析的亚株，建立的NIH/3T3细胞株又进行了五轮以上亚克隆。 这株细胞对DNA转化及转染研究十分有用。检测表明该细胞肢骨发育畸形病毒(鼠痘)阴性。
产品优势
质量控制规范
| Sample Name | Target Name | Cт Mean | ΔCт |
|---|---|---|---|
| NIH/3T3-CAS9 | Cas9 | 16.91583252 | 3.60078049 |
| NIH/3T3-CAS9 | β-actin | 13.31505203 | |
| NIH/3T3 | Cas9 | 33.85106277 | 20.10673046 |
| NIH/3T3 | β-actin | 13.74433231 |
注：上图为在NIH/3T3-CAS9稳转细胞株上，电转靶向Tmem65基因的gRNA质粒，药筛48h后取pool细胞检测的测序峰图。红色箭头标示处为套峰出现的位置，显示靶位点由于发生了切割而导致基因型明显改变，说明Cas9核酸酶成功表达。
拆箱和存放说明
细胞复苏、传代及冻存流程概述参考
参考文献
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