干货丨PANC-1 细胞培养&基因编辑实操要点

PANC-1是胰腺癌研究领域应用极广的经典细胞系，分离自 56 岁白人男性胰管上皮癌患者，细胞呈典型上皮形态，是胰腺导管腺癌体外建模、机制探索的核心工具细胞。据报道，该细胞带有KRAS（Gly12Asp）和TP53（Arg273His）突变，使用1 U/ml 左旋天冬酰胺酶(L-asparaginase)可抑制其生长。此外，该细胞可以在成纤维细胞和琼脂糖上快速生长，并在免疫缺陷型小鼠体内成瘤。小源现在就奉上PANC-1细胞独家培养秘籍，带大家一次性解锁PANC-1细胞的培养技巧与基因编辑实操要点！

一、人胰腺癌细胞(PANC-1)基本信息

• 细胞名称： 人胰腺癌细胞系(Panc-1)
• 细胞形态： 上皮样细胞，贴壁生长
• 细胞培养条件： 90%DMEM+10%FBS
• 气相： 空气，95%；二氧化碳，5%
• 温度： 37℃
• 换液频次： 2-3天/次
• 传代比例: 1:2-1:3

细胞生长状态参考：

正常状态： 呈现为不规则多边形，类似铺路石或鹅卵石；常有短小的突起或棘突；细胞大小不均一；呈单层生长，不重叠成堆。（见下图）

异常状态： 细胞失去原有的多边形细胞形态，细胞体积变大，细胞内空泡变多等。（见下图）

二、PANC-1细胞培养篇

• 细胞状态： 细胞生长至80-90%汇合度时传代最佳；对于生长中的细胞，每2-3天更换一次新鲜完全培养基。当细胞密度达到90%以上时，细胞会变得更加细长或挤压变形，多边形特征减弱，但通常不会自发性堆积成灶。
• 操作细节： PANC-1细胞容易聚团，消化时需尽量轻柔吹打多次使其成单细胞。
• 严格遵守基础培养条件： 确保细胞培养环境正常；使用正确的培养体系。
• 培养基保存： 确保培养基储存于4°C避光，并在有效期内使用。
• 提前预热： 操作前需预热培养基和胰酶至37℃，避免温度应激。
• 培养细节： 建议使用优质胎牛血清进行培养。

三、PANC-1细胞基因编辑篇

转染实验小Tips

1.细胞状态要求

• 确保细胞状态良好，使用处于对数生长期即汇合度在70-80%的细胞。
• 细胞活率＞80%，可通过台盼蓝进行检测。
• 使用低代次细胞。
• 注意细胞消化时间，避免过度消化，对细胞造成伤害。
• 该细胞容易聚团，实验过程需要尽可能轻柔吹打成单细胞，避免细胞聚团严重。

2.转染试剂与预实验

• 转染试剂使用前需要充分混匀保证其均匀性。
• 建议进行药筛预实验找到最佳药筛浓度，以便于转染后进行药筛。

3.电转法

• 控制细胞量，电转后根据细胞量接种至合适的培养板里。
• 使用温和的胰酶，并用含血清的培养基彻底终止消化。
• 用PBS洗涤细胞1-2次，彻底去除残留血清，避免离子干扰电穿孔。
• 进行预实验对电转参数进行优化。
• 保证电转后细胞贴壁率≥50%。
• 控制实验时间，电转全程不宜过长。

4.慢病毒法

• 进行预实验找到最合适的MOI。
• 转染前18-24h铺板，感染病毒前细胞汇合度控制在30-40%之间，不可过高。
• 使用低代次细胞。
• 感染前添加助染剂Polybrene。
• 感染后24h进行换液。
• 感染使用的病毒液避免反复冻融。
• 若感染效率过低可进行复感染（需确保细胞对病毒耐受性良好）或尝试使用离心法感染。

慢病毒感染后细胞图

铺单克隆实验小Tips

1.细胞状态要求

• 使用对数生长期的细胞进行铺克隆，铺克隆前细胞汇合度建议控制在70%左右。
• 细胞状态良好时铺克隆细胞活率一般≥90%。
• 使用低代次细胞。
• 注意细胞消化时间，避免过度消化，对细胞造成伤害。

2.试剂与预实验

• 提前预温所有试剂（包括培养基、PBS）。
• 建议使用温和消化试剂（如TrypLE Express）。

3.铺板策略

• 进行预实验找到合适的铺克隆梯度，避免单克隆占比太低。
• 细胞接种96孔板时需确保细胞分布均匀；外围96孔加入PBS防止蒸发。

4.稀释方法

• 使用“极限稀释法”进行铺克隆。
• 稀释细胞计数后结果最好落在1*10^6-2*10^6之间。