上调TREX1减少DNA片段积累或成类风湿性关节炎防治新策略!

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发布日期:2022年08月12日
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上调TREX1减少DNA片段积累或成类风湿性关节炎防治新策略!


背景

类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)是一种慢性全身性自身免疫疾病,发病机制尚不清楚研究表明,年龄、吸烟史、不良体质指数(BMI)、免疫原性和基因多态性多种因素RA的发病机制及其难治性有潜在关系作为生命中不可避免的过程衰老是各种疾病风险日益增加的一个主要因素

代谢性DNA损伤和免疫系统的持续激活是驱动细胞衰老的重要生物活动在衰老过程中,DNA片段在血液中积累并进入循环,成为循环自由DNA (cfDNA)。值得注意的是,DNA片段化也被认为是许多疾病的生物学特征创伤、败血症、无菌性炎症、心肌梗死、中风、移植排斥反应、糖尿病镰状细胞病Aicardi-Goutières综合征和家族性冻疮狼疮都有一个共同的表型特征——不能及时清除self-DNAself-RNA片段导致免疫系统异常激活经缓解病情抗风湿药(DMARDs)治疗后,RA患者血浆中的DNA片段化情况明显降低这说明DNA片段化可能与RA发病机制相关基于中老年人RA发病率升高可能与年龄相关的DNA片段积累有关的假设,弄清这些患者血浆DNA片段的来源研究如何提高清除机制效率可能为RA的防治策略开辟新途径。

为验证DNA片段导致类风湿关节炎发生的因素之一,来自澳门科技大学创新药物发现生物物理实验室中药质量研究国家重点实验室Weidan Luo研究团队做了一系列的研究并在Research Square上发表了一篇题为:Self-DNA accumulation as a risk factor for accelerating the pathogenesis of rheumatoid arthritis in elderly individuals的文章。该文章称DNA片段是炎症释放介质的有效制造者,而TREX1基因是DNA片段的有效降解者,并提示TREX1是调节细胞免疫和衰老的关键基因。这一结论为我们提供了一个预防类风湿性关节炎的新思路,即快速清除体内多余的DNA片段可确保衰老细胞保持健康。


3'->5' DNA外切酶TREX1在RA患者中显著下调

为了研究DNA片段的积累是否会刺激异常的免疫反应,作者首先测定了健康志愿者类风湿关节炎(RA)患者和骨关节炎(OA)患者外周血标本中TREX1 (DNA片段清除酶)和cGAS (DNA片段传感器)的基因表达水平1A 和图1 B结果显示,与健康对照组和OA患者相比,RA患者TREX1基因表达水平明显降,而cGAS基因表达水平明显升高,提示DNA片段积累与人类RA发病密切相关1C表明,与年幼的对照大鼠(4周龄)相比,健康老年大鼠(>12月龄)的血液样本中TREX1和cGAS的转录水平都很高。此外,TREX1的高表达清除老年大鼠过量的DNA片段,可以防止异常的免疫反应,维持动物的健康状态。


 

1

TREX1和cGAS信号通路在DNA片段诱导的促炎因子释放中的作用

研究人员DNA片段转染到RA-FLSs (类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞)可刺激DNA片段清除酶TREX1和cGAS-STING的表达,并上调促炎细胞因子(TNF-α, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-25 and IFN-β)表达,且呈剂量依赖性(图1D & E)然而,TREX1、cGAS-STING和促炎因子的表达增长发生在转染DNA片段后24小时内,在转染48至72小时后这些激活基因表达会下降。因此,作者推测,DNA片段诱导的TREX1上调可能有助于清除积累细胞质DNA片段,降低cGAS-STING和促炎因子水平。

不仅如此,Western blot结果也证实RA-FLSs中引入DNA片段,TREX1和cGAS蛋白的表达呈时间和剂量依赖性(图2A)。为了揭示TREX1和cGAS-STING信号通路在DNA片段诱导的炎性反应中的作用,在转染DNA片段前,用siRNA沉默RA-FLSs中TREX1和cGAS并构建了cGAS敲除RA-FLSs。如图2B所示,沉默TREX1基因表达激活了cGAS-STING信号,进一步促进转染了DNA片段的RA-FLSs促炎性细胞因子的释放,而敲除cGAS显著下调cGAS-STING信号抑制DNA片段诱导的促炎性细胞因子释放。这些结果证实DNA片段会激活炎症反应,TREX1和cGAS均在DNA片段介导的炎症反应中发挥调控作用。

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2

关节注射DNA片段诱TREX1条件敲除(TREX1Cre)大鼠关节炎

为阐明TREX1在AIA模型中DNA片段致病机制中的作用,作者通过CRISPR/Cas介导的基因组编辑,在SD大鼠中完成了Cre-loxP介导的TREX1条件敲除(TREX1Cre)其中Cre腺相关病毒由源井生物提供。图3A-C结果显示在TREX1Cre/+ AIA大鼠和健康对照TREX1Cre/+大鼠后肢关节腔内注射200ug DNA片段后,大鼠均出现严重的后爪肿胀、红斑和关节僵直TREX1基因敲除或下调可能会增加对照组和后肢关节注射DNA片段的AIA大鼠关节炎的严重程度研究结果提示TREX1可能通过清除关节组织中的cfDNA对RA有良好的治疗作用

 

3

DNA片段可促进TREX1Cre大鼠T细胞活化,减少Treg细胞数量

检测DNA片段对大鼠自身免疫反应的影响,将超声诱导的大鼠肌肉DNA片段经尾静脉注射至健康对照TREX1Cre/+大鼠和AIA模型TREX1Cre/+大鼠。与上述实验结果一致的是,注射DNA片段的健康对照TREX1Cre/+大鼠和AIA模型TREX1Cre/+大鼠后肢关节肿胀越严重,关节炎评分明显越高,骨破坏严重流式细胞仪分析结果显示,AIA TREX1Cre/−模型大鼠CD8+ T淋巴细胞数量明显增加,Treg细胞数量明显减少。静脉注射DNA片段后,AIA模型TREX1Cre/+ (Cre H/L)大鼠和健康对照TREX1Cre/+ (Cre H/L)大鼠与健康对照TREX1野生型大鼠相比,CD8+ T淋巴细胞数量增加,Treg细胞数量减少

 

4

腺相关病毒(AAV)介导的TREX1过表达抑制AIA大鼠滑膜炎症

为进一步研究TREX1在大鼠AIA发病机制中的作用,将表达TREX1的腺相关病毒(AAV-TREX1)注射到大鼠关节腔(2.5×1010 PFU或2.5×108 PFU)或尾静脉(1.0×1011 PFU或1.0×109 PFU)其中TREX1腺相关病毒由源井生物提供。注射AAV-EGFP的AIA大鼠(对照)后爪出现严重肿胀、红斑和关节僵直。AIA大鼠关节腔和尾静脉注射AAV-TREX1后,关节炎评分和后爪体积均显著降低,提示过表达TREX1的大鼠AIA的严重程度显著降低表明TREX1可能通过清除DNA片段在AIA大鼠关节炎的发生中发挥抑制作用。

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5

老化相关的细胞衰老和关节炎导致c-Jun/c- Fos转录因子表达失衡和TREX1表达抑制

为了进一步证明E2F1在TREX1表达中的作用,作者发现,E2F1在RA-FLSs中呈剂量依赖的过表达,TREX1和DP-1 (E2F转录因子的重要激活因子)的转录水平显著且逐渐升高与此同时,紫外线介导的DNA损伤和DNA片段直接攻击诱导了E2F1、DP-1、c-Jun和c-Fos的表达,同时TREX1在RA-FLSs中以时间依赖性的方式上调。然而,E2F1 siRNA的存在显著抑制了TREX1的高表达,表明E2F1是TREX1的关键转录因子。为了进一步阐明TREX1在衰老和RA中的调控作用,作者测定了在转染DNA片段的早期和晚期传代的RA-FLSsTREX1和AP-1复合物组分(c-Jun/c-Fos)的表达无论DNA片段转染成功与否,TREX1在晚期传代RA-FLSs中表达量均显著低于早期传代RA-FLSssiRNA敲降c-Fos显著抑制DNA片段介导的TREX1在早期传代RA-FLSs中的表达无论是在老化相关的细胞衰老中,还是在关节炎条件下,通过抑制TREX1的转录因子,如E2F1和AP-1, TREX1的表达,都能促进cfDNA的积累,从而激活自身免疫反应。

 

6

综上所述,该文章首次阐述了:DNA片段可能是诱发RA的潜在免疫原性因子 TREX1的下调促进促炎因子的释放并可能参与RA患者DNA片段的积累,从而激活cGAS/STING信号通路进一步加剧炎症反应。除此之外,该文章还将自身免疫组织炎症与衰老联系起来,将DNA片段的有效清除划定治疗和预防RA和衰老相关疾病的重要策略

    

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