基因敲除细胞株(系)_服务_公司

CRISPR

基因敲除

经典方法

· CRISPR-U™基因编辑细胞系 ·

CRISPR/Cas9系统的原理是利用gRNA特异性识别靶序列，并引导Cas9核酸内切酶对靶序列的PAM上游进行切割，从而造成靶位点DNA双链断裂，随之利用细胞的非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HDR）的方式对切割位点进行修复，实现DNA水平的敲除、敲入或点突变。
CRISPR-U™是源井生物自主研发的基因编辑技术（基于CRISPR/Cas9技术），CRISPR-U™技术比普通CRISPR/Cas9技术的基因切割效率更高，同时可以大幅度提升同源重组效率，轻松实现细胞和动物水平的基因敲除（KO）、基因点突变（PM）和基因敲入（KI）。利用CRISPR-U™的技术优势，源井生物已成功在超过100种细胞系上实现基因编辑。

点击查看100种基因编辑细胞成功案例

“凡是清单内的细胞基因编辑服务，源井生物均承诺失败全额退款”

内分泌系统	表皮，肌肉，骨骼相关系统	泌尿系统	呼吸系统
人乳腺癌细胞(MDA-MB-231) 小鼠乳腺癌细胞(4T1) 人胰腺癌细胞(PANC-1) 人乳腺癌细胞MCF7 人胰腺癌肿瘤细胞小鼠胰腺癌细胞人前列腺癌肿瘤细胞人前列腺癌细胞人前列腺癌细胞PC-3 人前列腺癌细胞LNCaP 小鼠胰腺腺泡细胞（266-6）人原位胰腺腺癌细胞BxPC-3 人乳腺管癌细胞T-47D	人骨肉瘤细胞（MG63）人骨肉瘤细胞U-2 OS 人纤维肉瘤HT1080 人成骨肉瘤细胞人永生化表皮细胞小鼠软骨祖细胞人恶性黑色素瘤细胞人恶性黑色素瘤细胞A-375 小鼠皮肤黑色素瘤细胞B16-F10 小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag14	人膀胱癌细胞人膀胱癌细胞5637 人肾上腺皮质腺癌细胞小鼠肾小球系膜多瘤细胞大鼠肾小球系膜细胞人体肾脏细胞系恒河猴肾细胞人肾癌细胞人胚肾细胞(HEK293) 人胚肾细胞(293衍生）人前列腺癌细胞22RV1	人肺癌细胞（A549）人肺癌细胞（表皮）小鼠肺癌细胞LLC 人非小细胞肺癌细胞 H1299 人肺腺癌细胞人正常肺上皮细胞（BEAS-2B）人支气管上皮细胞人胚肺成纤维细胞人胚肺细胞MRC-5 人咽鳞癌细胞FaDu 仓鼠肺细胞V79
消化系统	血液和淋巴系统	脑和神经系统	骨、关节、软组织、皮肤系统
人结肠癌细胞株HCT116 人结肠癌细胞(SW480) 人结肠癌细胞(HT-29) 人结肠腺癌细胞RKO 人结肠癌细胞COLO 205 小鼠结肠癌细胞CT26.WT 人结直肠腺癌上皮细胞DLD-1 人结直肠腺癌细胞NCI-H716 人肝癌细胞Hep G2 人肝癌细胞 Hep3B 人肝癌细胞HuH-7 人肝细胞性肝癌细胞大鼠肝癌细胞人原发性结直肠癌细胞人胃癌细胞(HGC-27) 人胃腺癌细胞AGS 人食鳞癌细胞人食管鳞癌细胞猪小肠上皮细胞人肾透明细胞腺癌细胞786-0 人结肠腺癌肺转移细胞T84	小鼠单核巨噬细胞白血病细胞 (RAW264.7) 人单核细胞白血病细胞（THP-1）人红白血病细胞人白血病细胞小鼠急性骨髓性白血病细胞小鼠髓系祖细胞系人原髓细胞白血病细胞HL-60 人白血病T淋巴细胞Jurkat, Clone E6-1 人慢性髓原白血病细胞K-562 人组织细胞淋巴瘤细胞U937	人神经母细胞瘤细胞小鼠神经母细胞瘤细胞小鼠神经母细胞瘤细胞Neuro-2a 人胶质瘤细胞(U251) 大鼠胶质瘤细胞(C6) 人脑胶质瘤细胞人脑胶质细胞人脑星形胶质母细胞瘤U-87 MG 大鼠穆勒细胞（rmc-1）	人骨肉瘤细胞（MG63）人骨肉瘤细胞U-2 OS 人纤维肉瘤HT1080 人成骨肉瘤细胞人永生化表皮细胞小鼠软骨祖细胞人恶性黑色素瘤细胞人恶性黑色素瘤细胞A-375 小鼠皮肤黑色素瘤细胞B16-F10 小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag14
		肿瘤组织	生殖系统
		小鼠的鳞癌细胞小鼠的肿瘤细胞人纤维肉瘤细胞（HT1080）尤文氏肉瘤细胞系	人宫颈癌细胞（HeLa）人卵巢腺癌细胞 C57BL/6小鼠胚胎干细胞小鼠胚胎成骨细胞前体细胞小鼠胚胎成纤维细胞（前脂肪）小鼠胚胎成纤维细胞仓鼠卵巢细胞亚株CHO-K1

· 技术优势 ·

独家创新技术，
基因编辑效率提升10倍;

超过100种细胞
基因编辑成功案例;

轻松实现基因敲除
基因点突变和基因敲入;

承诺项目失败全额退款，
成功保障安全无忧;

· 基因敲除细胞系 ·

通过病毒法，化学转染法或电转法将gRNA和Cas9转入细胞中，根据转染方法不同进行不同时长的药筛，药筛完成后挑选
单克隆培养。选择不同的克隆分别进行靶位点扩增及测序验证，筛选出移码敲除的阳性克隆。

· 常见基因敲除细胞系类型

	类别
敲除片段大小	小片段敲除；移码敲除；片段敲除（见下图）
转染方法	病毒法；化学转染法；电转染法
细胞类型	肿瘤细胞；其他细胞系；IPS/ES等

· 敲除方案 ·

源井生物根据客户需求，结合靶基因的情况进行敲除方案设计。

方案1

小片段敲除方案，gRNA设在外显子2两端的内含子中，敲除外显子编码碱基数为非3倍数，敲除后可造成移码。

方案2

移码敲除方案，gRNA设在外显子上，缺失的碱基数为非3倍数，敲除后可发生移码突变。

方案3

大片段敲除方案，将整个基因的编码序列敲除，达到大片段敲除的效果。

· 服务流程及质量控制 ·

· 应用案例 ·

中国仓鼠卵巢（CHO）细胞被用作生物工厂，用于生产一系列重组治疗蛋白，包括单克隆抗体和Fc融合蛋白。宿主细胞蛋白（HCP）是必须从治疗制剂中去除的杂质，因为它们具有潜在的免疫原性风险。虽然在典型的下游净化过程中，大多数HCP杂质被有效去除，但清除少量存在的HCP仍然是一个挑战。利用CRISPR/Cas9系统建立Anxa2和Ctsd基因敲除CHO细胞系，并证实了细胞裂解液中HCP完全消除。在培养过程中，所有的敲除细胞系都显示出与野生型对照相似的生长和活力。因此，敲除非必需基因可以减少重组治疗蛋白生产中HCP的污染。

（a）sgRNA打靶Anxa2基因的4号外显子。
对序列进行双向分析。

（b） sgRNA打靶Ctsd基因2号外显子。
对序列进行双向分析。

用SDS-PAGE和WB分析鉴定CHO基因敲除细胞株的蛋白表达。
（a） Anxa2基因敲除细胞系。
（b） Ctsd敲除细胞系。细胞培养上清液（47μg蛋白）和细胞裂解液（20μg蛋白）经4-20%SDS-PAGE分析。
CBB染色检测总蛋白。利用各自的捕获和检测抗体对每个蛋白质进行WB分析。星号表示非特定波段。双星号表示组织蛋白酶D的片段

在蛋白质表达分析中，没有观察到CHO-K1（WT）细胞系中的细胞培养上清液中的膜联蛋白A2和组织蛋白酶D。对贴壁的CHO-K1细胞进行静态培养，在培养过程中没有物理应力诱导细胞裂解，这表明CHO细胞分泌的这些蛋白质数量相当少。此外，在对Anxa2和Ctsd基因敲除细胞系的蛋白质表达分析中，没有观察到任何截短的HCP。

Reference：

Fukuda, N., Senga, Y., & Honda, S. (2019). Anxa2‐and Ctsd‐knockout CHO cell lines to diminish the risk of contamination with host cell proteins. Biotechnology progress, e2820.

基因敲除稳转细胞株

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CRISPR-B™ 微生物

CRISPR 载体

CRISPR 病毒