“基因魔剪”CRISPR/Cas9助力肝细胞癌（HCC）免疫治疗等研究

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为了探索SNORD17促进肝癌发展的分子机制，研究人员通过mRNA表达谱检测、Western Blot 检测、Luciferase报告基因检测、增殖、克隆形成实验发现p53可以通过调控SNORD17的表达进而影响HCC细胞生长。

综上所述，SNORD17通过与MYBBP1A结合并抑制其转移到核质，从而抑制乙酰基转移酶p300调节的p53乙酰化。SNORD17在HCC中调节p53的稳定性和活性，增加了p53调控网络的复杂性，有望成为HCC治疗的新靶点。同时该项研究也进一步证实了snoRNAs在肿瘤发生中的关键作用，并可作为各种癌症的预后标志物，这对后续的癌症治疗研究也起到了一定的借鉴作用。点击查看案例详情>>

CRISPR/cas9介导的NSD1敲除通过NSD1/H3/Wnt10b信号通路抑制HCC的发展

有研究表明，核受体结合的SET结构域蛋白1 (NSD1)的体细胞失调与HCC的肿瘤发生有关，提示NSD1可能是这种恶性肿瘤的预后靶点。因此，为了研究NSD1如何通过调控Wnt/β-catenin信号通路调控HCC进展，Zhang等研究人员利用CRISPR/Cas9基因组编辑系统构建NSD1基因敲除细胞株，通过肝癌细胞增殖、迁移和侵袭等一系列实验研究NSD1基因敲除细胞株，以及通过染色质免疫沉淀法(ChIP)研究NSD1基因对组蛋白H3、Wnt10b和Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。结果表明NSD1基因敲除可以抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。CRISPR/cas9介导的NSD1敲除促进了H3K27me3的甲基化，减少了H3K36me2的甲基化，从而抑制了Wnt10b的表达。结果表明，Wnt/β-catenin信号通路的失活抑制了肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

CRISPR/cas9介导的外显子跳跃内在激活β-catenin信号有助于HCC中的免疫逃逸

最近有研究通过对临床样本的综合分析，发现了肝细胞癌(HCC)的分子和免疫学分类，而CTNNB1 (β-catenin)突变亚型表现出免疫抑制肿瘤微环境的独特特征。为了阐明分子机制，Masafumi Akasu等研究人员通过修改lentiGuide-Puro质粒(Nat方法)，开发了一种高效的基于多重CRISPR/ cas9的外显子跳跃基因组工程系统，该系统由张峰实验室提供。利用该系统首次构建了β-catenin外显子3跳跃突变的人、小鼠肝癌细胞模型，促进核易位，激活Wnt/β-catenin信号通路。基因集富集分析表明，在激活β-catenin信号通路的HCC细胞中，免疫相关基因组下调。通过比较分析野生型和外显子3跳跃β-catenin的HCC细胞之间的基因表达谱，发现在人肝癌细胞和小鼠肝癌细胞中，4种细胞因子的表达水平普遍降低。373个人类HCC样本的公开外显子组和转录组数据显示，在具有β-catenin热点突变的HCC肿瘤中，两种候选细胞因子基因CCL20和CXCL2显著下调。T细胞杀伤试验和移植肿瘤组织的免疫组化分析表明，小鼠Ctnnb1^Δex3肝癌细胞逃过了免疫监测。综上所述，该研究发现由β-catenin信号激活控制的细胞因子可能有助于免疫逃逸，并为β-catenin突变的HCC亚型的癌症免疫治疗提供了新的见解。