干货|快收下SH-SY5Y细胞攻略！

干货|快收下SH-SY5Y细胞攻略！

SH-SY5Y细胞系，源自一位4岁女孩的骨髓样本，是一种人类神经母细胞瘤细胞系。它们在神经科学研究领域扮演着重要的角色，尤其是在研究帕金森病等神经退行性疾病的机制。科学家还可通过基因编辑技术，可以深入探究特定基因在神经元的功能及其在疾病中的作用。

SH-SY5Y细胞在培养和基因编辑时，操作细节很重要，因为微小的变化都可能对实验结果的准确性和细胞状态的稳定性产生一定影响。今天，让我们跟随小源老师，深入了解如何培养好SH-SY5Y细胞，并掌握基因编辑的关键技巧吧！

细胞基本信息

图1 细胞生长正常图片

（细胞呈上皮样，多数细胞贴壁生长，少数悬浮于培养基中，培养过程中绝大部分细胞呈现贴壁状态为正常现象；贴壁细胞会有短触角延伸出来）

图2 细胞生长状态差图片

（细胞形态发生改变，如细胞变圆、拉长或失去触角；聚团生长过度；死细胞成团漂浮） 

SH-SY5Y细胞培养

1. 细胞复苏

1) 准备：取7mL完全培养基于离心管中备用。

2) 解冻：将细胞从干冰里取出，用镊子夹住盖子放入 37℃水浴中快速晃动（注意：水不能没过盖子），使其在1分钟左右完全融化，直至冰块融化至绿豆大小，停止水浴。

3) 离心：将解冻后的细胞悬液转移至离心管中，1100rpm条件下离心4分钟，弃去上清液。

4) 重悬与接种：用完全培养基重悬细胞，接种于合适大小的培养皿或培养瓶中。

5) 培养：将培养皿或培养瓶置于37℃、5% CO₂培养箱中培养，24小时后观察细胞状态及贴壁情况。

细胞传代（以T25瓶为例）：

1) 当细胞汇合度达到80-90%时可进行传代，传代时在超净台内弃去培养瓶里的培养液，加入5mLPBS洗涤细胞1-2次

2) 加入1mL胰酶，轻轻晃动瓶子并使胰酶完全浸过细胞，将培养瓶放入培养箱孵育 1-2分钟，待在显微镜下观察到大部分细胞变圆变亮，轻轻晃动培养瓶两侧有大部分细胞脱落时，立即终止消化

3) 加入2倍胰酶体积即2mL完全培养基终止消化，然后转移至15mL离心管中

4) 1100 rpm 室温离心 4 分钟，离心结束，弃去上清，加入完全培养基重悬细胞

5) 细胞按照1:2-1:3比例传代，传代第二天观察细胞状态

细胞冻存：

1) 收集细胞：按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中

2) 离心：1100rpm条件下离心4分钟，去掉上清

3) 重悬与冻存：用细胞冻存液重悬细胞，按每1mL冻存液含1×10^6个细胞/mL分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息

4) 降温与储存：将冻存管置于程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜后转入液氮罐内保存

SH-SY5Y培养注意事项：

1.该细胞培养时以悬浮细胞和贴壁细胞的混合形态生长。如果培养过程中多数以贴壁细胞生长，悬浮细胞占少数或几乎没有，可按贴壁细胞细胞的方式进行消化和培养。

2.如果培养过程中发现悬浮的细胞数量比较多，或者细胞聚团且生长缓慢，则需要在换液和传代时通过离心收集这些悬浮细胞，并且尽快更换高质量的血清以促进细胞贴壁和生长。

3.该细胞对血清质量敏感，建议使用高质量胎牛血清进行培养。

FAQ

细胞状态差如何调整？

1. 培养基和血清：确保使用正确的基础培养基和加入适量血清，血清浓度可根据细胞状态适当调整。

2. 细胞培养环境：确认培养温度、湿度、气相条件是否正常。

3. 避免使用过期或长时间存放的培养基，新鲜配制的完全培养基建议在两周内使用完毕。

4. 细胞传代操作：细胞传代时，注意消化时间和胰酶浓度，避免因消化时间过长或过短导致的细胞损伤。

细胞结团如何调整？

1. 调整细胞密度

· 控制接种密度：控制接种密度不要过高，以减少细胞聚集成团的机会。一般建议细胞密度达到80%左右进行传代。

· 低密度传代：可以尝试低密度传代，即减少每次传代的细胞数量，这有助于细胞在培养瓶中更均匀地分布。

2. 优化培养条件

· 培养基选择：确保使用正确的SH-SY5Y细胞生长的培养基，并根据需要调整培养基的成分，如血清浓度等

· 确保培养环境适宜，如稳定的温度、湿度和CO₂浓度等

3. 注意消化操作

· 延长消化时间：如果细胞结团是由于消化不充分引起的，可以适当延长消化时间，但要避免过度消化导致细胞损伤。

· 轻柔吹打：在消化过程中和传代时，用移液枪或吸管轻柔地吹打细胞悬液，以分散细胞团块。注意吹打力度要适中，避免产生气泡

基因编辑Tips

SH-SY5Y细胞转染时注意事项：

1. 确保细胞状态良好，细胞处于对数生长期，细胞密度一般处在80-90%。

2. 注意细胞消化时间，避免过度消化，对细胞造成伤害。

3. 实验过程中细胞要吹打成单细胞，避免细胞聚团。

4. 细胞进行实验时活率≥80%。

电转法需注意：

1. 电转法进行实验时控制好电转细胞量，电转后接种到合适的培养皿里。

2. 用电转法进行实验时要保证电转后细胞贴壁率≥70%。

3. 用电转法进行转染时需控制好实验时间，电转全程不宜过长。

慢病毒法需注意：

1. 慢病毒法进行实验时要控制好感染前的细胞汇合度，不可过高。

2. 选用病毒法进行正式实验前可进行预实验找到最合适的MOI；感染前添加助染剂Polybrene。

3. 对于转染试剂使用前需要充分混匀保证其均匀性。

SH-SY5Y铺单克隆实验注意事项：

1. 确保铺克隆实验前细胞状态正常，建议控制细胞汇合度在70%左右

2. 铺克隆时细胞活率≥80%

3. 可先进行预实验找到合适的铺克隆梯度，避免单克隆占比太低

4. 稀释细胞计数后结果最好落在1*10^6-2*10^6之间

图3 慢病毒感染SH-SY5Y细胞

图4 SH-SY5Y细胞单克隆