ANXA2基因敲除细胞系——助力研究肿瘤的发生发展

膜联蛋白A2(annexin A2，ANXA2)基因位于15号染色体，由339个氨基酸组成，其大小为36kDa。其编码的蛋白是膜联蛋白家族的重要成员，是一种钙离子依赖的磷脂结合蛋白，广泛存在于植物和动物中。很多细胞都可以产生ANXA2，包括血管内皮细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、滋养层细胞、上皮细胞、肿瘤细胞等。ANXA2可以在细胞质中以游离的单体存在，可以与细胞内膜结合，或者依附于质膜的外表面。主要是参与膜转运及膜表面一系列依赖于钙调蛋白的活动，包括胞吐作用中的膜融合、囊泡运输、细胞黏附、细胞增殖、凋亡、复制、信号传导以及离子通道的形成。

近年来大量的研究已经证实，ANXA2的表达失调与多种肿瘤的发生发展密切相关，其表达在人类绝大多数肿瘤中均上调，这种过表达现象与肿瘤的发生，发展，浸润，转移及预后差等密切相关。而细胞骨架在细胞运动，迁移以及维持细胞形态稳定中起着非常重要的作用。

ANXA2对人结直肠癌细胞行为的调节作用研究

有报道显示，ANXA2与肌动蛋白F-Actin等骨架蛋白以及多种与细胞骨架变构、运动相关的调节因子相互作用，从而影响肿瘤细胞的恶性行为。因此为了确切地揭示ANXA2在肿瘤特别是结直肠癌的发展过程中的作用，研究人员以人结直肠癌细胞系Caco2为靶细胞，对该细胞的ANXA2基因进行了敲除，获得了ANXA2-/-Caco2细胞系，以野生型Caco2细胞(ANXA2+/+Caco2)为对照，研究了ANXA2基因的表达对癌细胞的生长、运动、凋亡的影响。结果发现：敲除ANXA2基因后，扫描电镜结果显示，caco2细胞表面的丝状伪足生长缓慢,微绒毛明显变细变少；透射电镜结果显示，ANXA2-/-caco2细胞内可见更多的染色质凝集、线粒体减少、核膜解聚；野生型caco2细胞的F-actin沿着质膜内表面和胞质密集的分布，而ANXA2-/-caco2细胞中F-actin沿着质膜和胞质内的分布明显减少，β-tubulin在胞质内的分布减少，但差异不明显；野生型caco2细胞的laminB在细胞核膜内侧密集的分布，而ANXA2-/-caco2细胞中laminB在胞核膜内侧的分布明显减少。构建ANXA2 KO细胞系离不开高效的敲除载体，源井ANXA2 gRNA敲除载体能很好地满足实验需求。除此以外，库内还有超10000种现货载体，感兴趣的话欢迎点击查看>>

由此得出结论：ANXA2与人结直肠癌caco2细胞的生长、增殖、凋亡及运动力密切相关，抑制ANXA2的表达可抑制caco2细胞的增殖力和体外迁移能力，促进细胞凋亡。

构建ANXA2 KO CHO细胞系评估敲除对降低HCP污染的影响。

中国仓鼠卵巢(CHO)细胞常被当作宿主细胞，用于生产一系列重组治疗蛋白，包括单克隆抗体和fc融合蛋白。这生产过程中，由于宿主细胞蛋白(HCP)对免疫原性有潜在风险，因此必须从治疗配方中去除。虽然大多数HCP杂质可以在典型的下游净化过程中有效去除，但清除少量HCP仍然具有挑战性。

研究人员利用CRISPR/Cas9系统，成功构建了ANXA2和ctsd敲除的CHO细胞株，以评估敲除方法降低HCP污染风险的可行性。实验结果证实了在细胞裂解液中完全消除了相应的HCP。重要的是，在8天的培养过程中，所有的敲除细胞株都显示出与野生型对照相似的生长和活力。因此，敲除不必要的基因可以减少HCP对重组治疗蛋白生产的污染。然而，确定基因敲除对这类细胞系产量的影响还有待进一步研究。

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构建ANXA2基因敲除MDCK细胞系验证ε毒素在MDCK细胞表面的受体。

研究人员根据CRISPR/Cas9靶点设计原则设计靶点，构建PALentiCRISPR v2重组质粒。并将构建好的质粒转染至MDCK细胞中，用嘌呤霉素筛选敲除ANXA2蛋白的MDCK细胞株，通过细胞毒性试验验证MDCK细胞膜表面的ANXA2蛋白是否为ε毒素的受体蛋白。细胞毒性试验结果表明，敲除ANXA2基因并不能减弱ε毒素对MDCK细胞的毒性。说明了ANXA2蛋白不是ε毒素在MDCK细胞表面的受体。研究结果为今后MDCK细胞其他蛋白的敲除提供了试验方法，构建的ANXA2基因敲除的MDCK细胞也为ANXA2蛋白引起的其他疾病的研究奠定了基础。如果您对此感兴趣，源井可提供多种MDCK细胞，包括KO/野生型/Cas9/Luc细胞等，欢迎点击了解>>

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参考文献：

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[4] 黄静,高洁,夏苏苏,金志颖,康琳,高姗,杨浩,辛文文,赵宝华,王景林.Annexin A2基因敲除MDCK细胞系的构建[J].动物医学进展,2019,40 (05):13-17.DOI:10.16437 /j.cnki.1007-5038.2019.05.003.